??????碧云天生產(chǎn)的鹽酸乙醇慢速分化液(Acid Alcohol Slow Differentiation Solution)是一種用于蘇木素染色、蘇木素伊紅染色(HE染色)或Masson染色等涉及蘇木素染色時,相對較為緩慢地降低細胞漿等背景性的蘇木素染色并使細胞核蘇木素染色更清晰的溶液。 ??????碧云天生產(chǎn)的鹽酸乙醇慢速分化液,分化時間較慢,約需30秒,便于更精細地控制分化時間。如果希望更快速地完成分化,可以考慮選購鹽酸乙醇快速分化液(C0163)或鹽酸乙醇超快速分化液(C0165)。 ??????使用本產(chǎn)品可獲得更好的蘇木素染色效果。本產(chǎn)品的基本原理是在酸性條件下,可以有效洗去細胞核以外的蘇木素染色,從而降低背景;同時,也可以使細胞核著色過深的區(qū)域染色適當減弱,使染色更清晰。 ??????蘇木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining),也被稱作蘇木精染色,是最常用的組織和細胞的染色方法之一。無色的蘇木素(hematoxylin)氧化后形成有醌環(huán)結(jié)構(gòu)(quinoid ring)的氧化蘇木素(hematein or haematein),從而可以和三價的鋁離子、鐵離子等形成有顏色的帶正電荷的復(fù)合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化蘇木素(也稱氧化蘇木精)和鋁離子等形成有色的復(fù)合物的過程也被稱為Dye Lake Formation。細胞核內(nèi)基因組DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,雙鏈上的磷酸基團向外,帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的氧化蘇木素復(fù)合物結(jié)合,從而形成細胞核染色。蘇木素染色液有多種不同的配制方法,不同的方法可以把細胞核染色成不同深淺的藍色或藍紫色。 ??????蘇木素是優(yōu)良的細胞核染色劑,但由于細胞質(zhì)中RNA和線粒體DNA的存在,也會導(dǎo)致細胞質(zhì)中出現(xiàn)非預(yù)期的染色。因此蘇木素染色后經(jīng)常會出現(xiàn)細胞質(zhì)有較高背景或細胞核染色過深的情況。鹽酸乙醇分化液的作用主要通過溶液中的pH值等以弱化氧化蘇木素和RNA或DNA形成有色的復(fù)合物從而使細胞質(zhì)中幾乎沒有蘇木素染色,而細胞核的蘇木素染色比較適中。分化過程中,細胞核中的蘇木素染色在酸性條件下呈現(xiàn)紅色,當細胞核的顏色達到適宜程度時,立刻用自來水洗滌以終止分化,此時細胞核中蘇木素染色在近中性的條件下而轉(zhuǎn)變?yōu)樗{色,稱為返藍或發(fā)生藍化作用。分化的適宜程度是指經(jīng)水洗返藍后用顯微鏡觀察,細胞核膜特別是細胞核染色質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰,而細胞漿及其它部分基本沒有背景染色,后續(xù)再用伊紅染色,就能獲得細胞核與細胞漿藍紅相映、鮮艷漂亮的染色結(jié)果。如果分化不充分,細胞核為深藍色,不能辯認出核膜及染色質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu),且細胞漿等仍有淺藍色背景,經(jīng)伊紅染色后即成紅紫色,會影響觀察效果。如果分化過度,細胞核染色會呈現(xiàn)淺藍色,導(dǎo)致僅能看出輪廓甚至模糊不清。 ??????本鹽酸乙醇分化液的組分經(jīng)過反復(fù)優(yōu)化,分化速度相對較慢,通常需分化30秒左右,可以比較精細地控制分化時間,特別適合對于蘇木素染色分化的要求非常精細或者對于分化操作不是很熟練的實驗人員。蘇木素染色后的組織切片經(jīng)本分化液分化處理后,核質(zhì)著色更加清晰分明。本產(chǎn)品用于石蠟切片蘇木素染色后的分化前后同一視野效果圖參考圖1。
??????圖1. 本產(chǎn)品用于小鼠睪丸石蠟切片蘇木素染色后同一視野分化前后的實拍效果圖。左圖為未經(jīng)分化處理的效果圖,右圖為經(jīng)本產(chǎn)品分化處理后的效果圖。從圖中可見,經(jīng)本產(chǎn)品分化處理后,蘇木素染色的細胞核呈現(xiàn)藍色,核質(zhì)清晰分明,背景呈現(xiàn)純凈的白色。本圖僅作參考,不同的樣品不同的檢測條件,實際獲得的結(jié)果可能有所差別。Scale bar, 100μm。
??????按照每個樣品使用0.2ml鹽酸乙醇分化液計算,一個包裝的C0161S、C0161M和C0161L分別可以分化500個、2500個和10000個樣品。如果用于浸泡式的分化操作,建議在使用約10-20次并且分化效果明顯減弱后更換分化液。 包裝清單:
保存條件: ??????室溫保存,至少一年有效。 注意事項:? ??????本產(chǎn)品易揮發(fā),請注意密閉保存。為避免揮發(fā)導(dǎo)致的使用效果下降,開啟后宜盡快用完。 ??????染色后的分化為選做步驟,但分化后核質(zhì)染色更清晰,核膜及染色質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)更清楚。 ??????樣品數(shù)量很多時,可以使用碧云天生產(chǎn)的染色架(FJ024、FJ026、FJ030、FJ060)和染色缸(FG005、FG010、FG030、 FG060),便于操作。 ??????如果訂購的是C0161L鹽酸乙醇慢速分化液(20X),需要自備75%乙醇,以用于把鹽酸乙醇慢速分化液(20X)稀釋20倍配制成鹽酸乙醇慢速分化液。 ??????不同樣品和不同染色要求,所需要的分化時間會有所不同。初次使用本產(chǎn)品建議先摸索不同分化時間,根據(jù)鏡下觀察結(jié)果,確定的分化時間。也可以根據(jù)需求選擇碧云天的鹽酸乙醇快速分化液(C0163)或鹽酸乙醇超快速分化液(C0165)。 ??????本產(chǎn)品為易燃液體,須密閉儲存于陰涼、干燥、通風(fēng)良好的地方,建議存放在易燃液體的專用安全柜中,并遠離明火、火花、熱源、熱表面,禁止吸煙。 ??????本產(chǎn)品有腐蝕性,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或腐蝕其他物品。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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