新型冠狀病毒（2019-nCoV）假病毒核糖核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為測量標(biāo)準(zhǔn)，參與從 RNA 提取至核酸擴(kuò)增檢測全過程，用于新型冠狀病毒特征基因的定性和定量測量、方法驗(yàn)證以及實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制。?

一、樣品制備?

本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是將新型冠狀病毒重要特征基因核殼蛋白 N 基因（全長）、包膜蛋白 E 基因（全長）和開放閱讀框 1ab（ORF1ab）基因片段（基因組坐標(biāo)：13201-15600 和 18500-19000，GenBank No.NC_045512）構(gòu)建至慢病毒載體，轉(zhuǎn)染細(xì)胞后獲得假病毒顆粒，經(jīng)過純化后稀釋至一定濃度分裝。?

二、溯源性及定值方法?

采用數(shù)字 PCR 方法對(duì) N、E 和 ORF1ab 基因進(jìn)行拷貝數(shù)濃度測定，作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值。本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)通過使用滿足計(jì)量學(xué)特性要求、經(jīng)確認(rèn)的絕對(duì)定量測量方法和經(jīng)檢定校準(zhǔn)的容量計(jì)量器具，確保本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值溯源至可作為任何一個(gè)量制基本單位的實(shí)體數(shù)基本單位“一”（符號(hào)：1）以及體積的國家法定計(jì)量單位升（L）。?

三、特性量值及不確定度

四、均勻性及穩(wěn)定性評(píng)估參照 JJF1343 國家計(jì)量技術(shù)規(guī)范（等效 ISO 指南 35），采用數(shù)字 PCR 方法對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)研究，結(jié)果表明均勻性良好，最小取樣量 140 μL。采用數(shù)字 PCR 方法對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行了初步穩(wěn)定性研究，參考同類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，自定值日期起，有效期暫定為 6 個(gè)月，研制單位將繼續(xù)跟蹤監(jiān)測該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性，有效期內(nèi)如發(fā)現(xiàn)量值變化，將及時(shí)通知用戶。五、包裝、貯存及使用1.包裝規(guī)格：本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用 1.5mL 帶內(nèi)蓋彩色凍存管包裝，每管 200μL，最小取樣量為 140 μL。2.保存條件及運(yùn)輸：置于-70℃冰箱中保存。采用干冰運(yùn)輸，收到標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后應(yīng)檢查標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是否處于冰凍狀態(tài)。檢查無誤才可用于實(shí)驗(yàn)。3.本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作，須在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室（BSL-2/P2）條件下，佩戴乳膠手套和防護(hù)口罩，在生物安全柜中進(jìn)行。4.本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)開瓶后一次性使用，不可反復(fù)凍融。使用前應(yīng)從冰箱內(nèi)取出，平衡至室溫并混勻。5.推薦使用 Qiagen 52904/52906 病毒 RNA 提取試劑盒提取 RNA。6.使用本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行 ORF1ab 基因測量時(shí)，請(qǐng)仔細(xì)核實(shí)擬使用的 PCR 引物序列在新型冠狀病毒基因組的坐標(biāo)。引物序列不能超出“樣品制備”部分描述的基因組坐標(biāo)范圍。7.進(jìn)行梯度稀釋時(shí)，推薦使用專用 RNA 保存液進(jìn)行稀釋。8.使用后的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)包裝瓶以及移液器吸頭等實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)在丟棄前進(jìn)行高壓滅菌。