產(chǎn)品名稱:腐霉菌PCR試劑盒
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本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒,它具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2.引物等組分經(jīng)過優(yōu)化,靈敏度高。
3.提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他的DNA/RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數(shù)量級。
6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的染料法熒光定量PCR反應(yīng)。
包裝規(guī)格及成分(具體信息詳見說明書):
腐霉菌PCR試劑盒的制備
1. 如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取反應(yīng),多出的兩個中一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?nbsp;10μL 牛乳頭瘤病毒 PCR 陽性對照(1×10E6 拷貝/μL,本試劑盒提供)再加上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ?。
2. 用自選方法純化上述 N+2 個樣品的 DNA。本試劑盒跟市場上大多數(shù)細菌DNA提取試劑盒兼容。
電泳分析
1. 取 5-10uL 擴增產(chǎn)物進行常規(guī)瓊脂糖電泳,檢測擴增效果,由于擴增產(chǎn)物較短,建議用 1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。
2. 陽性樣品預(yù)期得到的擴增產(chǎn)物長度為 200bp 左右。如果兩個陰性對照(樣品制備陰性對照或 PCR 陰性對照)有此擴增產(chǎn)物,說明環(huán)境污染,則整個實驗無效,不需要分析實驗結(jié)果。
3. 如果所有樣品和 PCR 陽性對照均無此擴增產(chǎn)物,則說明有系統(tǒng)性的問題(試劑、設(shè)備、程序、操作等),需要重復(fù)并排查原因。
4. 如果沒有上述兩種情況,則實驗有效,可以分析樣品的擴增結(jié)果。N+2 個樣品中有擴增產(chǎn)物的判定為陽性,無則判定為陰性。
腐霉菌PCR試劑盒樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。陽性對照需單獨放置,不要污染其他試劑。
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
4、自備試劑:樣品DNA。
腐霉菌PCR試劑盒注意事項:
1 所有操作嚴格按照說明書進行;
2試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,混勻并短暫離心;
3 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;
7 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
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