細(xì)胞名稱：人未分化肝癌HLF/LUC(帶熒光素酶)
細(xì)胞代次：P4
細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）
細(xì)胞凍存：無血清凍存液
細(xì)胞傳代：第一次建議1:2
人未分化肝癌HLF/LUC(帶熒光素酶)細(xì)胞收到后處理
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作，將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。（換液后將瓶蓋擰松）
1、收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：
取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
2、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項：有些細(xì)胞貼壁不牢，在運(yùn)輸過程中容易發(fā)生細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象。如脫離較多可將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml完全培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
人未分化肝癌HLF/LUC(帶熒光素酶),售后服務(wù)
1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；
2. 細(xì)胞污染問題，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā)；
3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，（需提供真實清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)；
4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；
5. 細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，核實后予重發(fā)；
6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費(fèi)重發(fā)。
2）細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
1. 客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
6. 細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
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| GT1558LUC | OCIAML5/LUC | 人急性髓細(xì)胞白血病OCIAML5/LUC(帶熒光素酶) | 4500 | 1640+10%FBS+10ug/mlGM-CSF+1%P/S懸浮 |
| GT1559LUC | HCC1569Her2neu的表達(dá)呈陽性，p53的表達(dá)呈陰性/LUC | 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞HCC1569Her2neu的表達(dá)呈陽性，p53的表達(dá)呈陰性/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS |
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| GT1561LUC | KNS62/LUC | 人肺支氣管鱗狀細(xì)胞癌KNS62/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+20%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1562LUC | HCC95/LUC | 人肺腺癌細(xì)胞HCC95/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1563LUC | HARA/LUC | 人肺腺癌細(xì)胞HARA/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1564LUC | EPLC272H/LUC | 人肺腺癌細(xì)胞EPLC272H/LUC(帶熒光素酶) | 4000 | 1640+20%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1565LUC | NCIH810/LUC | 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCIH810/LUC(帶熒光素酶) | 5000 | D/F12+10%FBS+1%ITS（10ug/mL胰島素；轉(zhuǎn)鐵蛋白5.5ug/mL;5ng/mL硒）+40ng/ml地塞米松+1%P/S |
| GT1566LUC | FTC238/LUC | 人濾泡狀甲狀腺癌細(xì)胞FTC238/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | D/F12+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1567LUC | SNU719/LUC | 人胃癌細(xì)胞SNU719/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1568LUC | IM95m/LUC | 人胃癌細(xì)胞IM95m/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+10%FBS+1%P/S半貼壁 |
| GT1569LUC | OCUM1/LUC | 人胃癌細(xì)胞OCUM1/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+10%FBS+1%P/S懸浮 |
| GT1570LUC | Karpas422/LUC | 人非霍奇金淋巴瘤Karpas422/LUC(帶熒光素酶) | 4000 | 1640+20%FBS+1%P/S懸浮 |
| GT1571LUC | MOLM16/LUC | 人骨髓白血病細(xì)胞MOLM16/LUC(帶熒光素酶) | 4000 | 1640+20%FBS+1%P/S懸浮 |
| GT1572LUC | NCIH1793/LUC | 人非小細(xì)胞肺癌腺癌細(xì)胞NCIH1793/LUC(帶熒光素酶) | 5000 | DF12+10%FBS,10nMbeta-estradiol,10nMHydrocortisone,0.005mg/mllnsulin,0.01mg/mlTransferrin.30nMSodiumselenite貼壁 |
| GT1573LUC | NOMO1/LUC | 人白血病細(xì)胞NOMO1/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%P/S懸浮 |
| GT1574LUC | OCIM2/LUC | 人急性粒細(xì)胞白血病OCIM2/LUC(帶熒光素酶) | 4000 | 1640+20%FBS+1%P/S懸浮 |
| GT1575LUC | NCIH2227/LUC | 人小細(xì)胞肺癌NCIH2227/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DF12+10%FBS,10nMbetaestradiol,10nMHydrocortisone,0.005mg/mllnsulin,0.01mg/mlTransferrin.30nMSodiumselenite半貼壁 |
| GT1576LUC | SNU475/LUC | 人肝癌細(xì)胞SNU475/LUC(帶熒光素酶) | 4000 | 1640+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1577LUC | HCC4006/LUC | 人肺腺癌細(xì)胞HCC4006/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1578LUC | L363/LUC | 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞L363/LUC(帶熒光素酶) | 4000 | 1640+10%FBS+1%P/S懸浮 |
| GT1579LUC | CORL23/LUC | 人肺癌細(xì)胞大細(xì)胞CORL23/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1580LUC | CAL12T/LUC | 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞CAL12T/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1581LUC | NCIH1838/LUC | 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCIH1838/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1582LUC | NCIH2110/LUC | 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCIH2110/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1583LUC | NCIH2172/LUC | 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCIH2172/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1584LUC | HCC44/LUC | 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞HCC44/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%P/S貼壁 |
| GT1585LUC | MKN1/LUC | 人胃癌細(xì)胞MKN1/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%P/S貼壁 |
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