HMC-1 人肥大細胞 一、細胞基本屬性 細胞名稱 HMC-1 人肥大細胞 細胞別稱 HMC-1  種屬來源 人 生長特性 懸浮生長 細胞形態(tài) 淋巴母細胞樣 簡介 來源于一名 52 歲男性肥大細胞白血病患者的外周血樣本。該細胞有多重亞型分別 為：HMC-1 5C6，HMC-1.1 ，HMC-1.2 。廣泛用于人肥大細胞功能研究，因為它們 表現(xiàn)出組織肥大細胞的許多關(guān)鍵特征，例如組胺、類胰蛋白酶、肝素和類似細胞表 面抗原譜的表達 （1,2）。受體酪氨酸激酶 KIT 在肥大細胞上表達，在肥大細胞 的增殖、功能和存活中起重要作用。KIT 中的激活突變與肥大細胞生長失調(diào)有關(guān)， 并與肥大細胞腫瘤和系統(tǒng)性肥大細胞增多癥有關(guān)。據(jù)報道，HMC-1 細胞系中存在兩 個 KIT 激活點突變 。這兩種突變都將受體轉(zhuǎn)化為組成型酪氨酸磷酸化和活性狀態(tài) ，導(dǎo)致生長因子非依賴性增殖。HMC-1.1 （HMC-1（560）） 和 HMC-1.2 （HMC-1 （560,816））是HMC-1 細胞系的兩個變異亞系。HMC-1.1 具有 V560G 突變，但不 具有 D816V 突變。HMC-1.2 同時具有 V560G 和D816V 突變，并且表現(xiàn)出比 HMC- 1.1 更高的增殖率。有人認為，HMC-1.2 的較高增殖潛力可能歸因于 D816V 突變 。 生物安全等級 1 細胞規(guī)格 1×10 6cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 支原體檢測 無 培養(yǎng)基 準(zhǔn)備 IMDM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 培養(yǎng)條件 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ 凍存條件 無血清凍存液，液氮儲存 細胞接收后的處 理 1）收到細胞后，75%酒精消毒15ml離心管，若發(fā)現(xiàn)有破損、有液溢出及 細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。 2）離心管直接在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基 重懸細胞后，根據(jù)離心后的沉淀量進行傳代，轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中后，請 在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20× ）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的 依據(jù)。 3）懸浮細胞：傳代時使用【半換液法】對細胞狀態(tài)有利，因此我?guī)旖ㄗh 您使用【半換液法】進行傳代，剛收到細胞時建議1:2傳代較為合適。將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含8mL完全培 養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。 然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下 觀察細胞生長情況和細胞密度。 如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。 對于懸浮細胞傳代可以參考以下方法： 對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法【半換液法】： 懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般 情況下細胞密度維持在1×10 5~1×10 6個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正 常生長。 【離心換液法】： 如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培 養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配 置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。 1） 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面 T25瓶為例； 1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)， 來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10 6~1×10 7個活細胞/ml. 2. 1000rpm離心5min，去掉上清。用無血清細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1× 10 6~1×10 7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、 日期等信息。 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同 時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。 三．細胞出現(xiàn)問題，予以重發(fā)情況： 1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)； 2. 細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品3 天內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā)； 3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后2 天后，絕大多數(shù)細胞未存活，（需提 供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)； 4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后2天后或常溫發(fā)貨的細胞靜置2 小時候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)； 5. 細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力， 和每天的細胞照片，核實后予重發(fā)； 6. 細胞收到當(dāng)天以及第2,3 天請拍照，3 天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7 天內(nèi)出現(xiàn)問題需提供收到 細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題的照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù) 人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。 四、細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況： 1. 客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)； 2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；3. 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 4. 細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3 天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)； 5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)； 6. 收到細胞并發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于7 天的，不重發(fā)； 7. 視具體情況而定 注意事項： 1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護， 所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 2. 建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液 氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹 掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。