來源:Canavalia ensiformis
酶活:1U/mg
低溫運輸,-20℃保存
脲酶 (尿素酶 巨豆)(Urease(Jack Bean))
1. DNA帶模糊
1) DNA降解:避免核酸酶污染;
2) 電泳緩沖液陳舊:電泳緩沖液多次使用后,離子強度降低,pH值上升,緩沖能力減弱,從而影響電泳效果。建議經(jīng)常更換電泳緩沖液;
3) 所用電泳條件不合適:電泳時電壓不應(yīng)超過20V/cm,溫度<30℃;巨大DNA鏈電泳,溫度應(yīng)<15℃;核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力;
4) DNA上樣量過多:減少凝膠中DNA上樣量;
5) DNA樣含鹽過高:電泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽;
6) 脲酶 (尿素酶 巨豆)(Urease(Jack Bean))有蛋白污染:電泳前酚抽提去除蛋白;
7) DNA變性:電泳前勿加熱,用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA。
2. 不規(guī)則DNA帶遷移
1) 對于λ/Hind III片段cos位點復(fù)性電泳前于65℃加熱DNA 5分鐘,然后在冰上冷卻5分鐘;
2) 電泳條件不合適:電泳電壓不超過20V/cm;溫度<30℃;經(jīng)常更換電泳緩沖液;
3) DNA變性:以20 mM NaCl Buffer稀釋DNA,電泳前勿加熱。
3. 帶弱或無DNA帶
1) DNA的上樣量不夠:脲酶 (尿素酶 巨豆)(Urease(Jack Bean))增加DNA的上樣量;聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度稍高,上樣量可適當(dāng)降低;
2) DNA降解:避免DNA的核酸酶污染;
3) DNA走出凝膠:縮短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度;
4) 對于EB染色的DNA,所用光源不合適:應(yīng)用短波長(254nm)的紫外光源。
4. DNA帶缺失
1) 小DNA帶走出凝膠:縮短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度;
2) 分子大小相近的DNA帶不易分辨:增加電泳時間,核準(zhǔn)正確的凝膠濃度;
3) DNA 變性:電泳前請勿高溫加熱DNA鏈,以20 mMNaCl Buffer稀釋DNA;
4) DNA鏈巨大,常規(guī)凝膠電泳不合適:在脈沖凝膠電泳上分析。
5. DNA電泳的Marker怎么是扭曲的?
1)脲酶 (尿素酶 巨豆)(Urease(Jack Bean))配制膠時的緩沖液需要和電泳緩沖液不是同時配制的。*是同時配制.電泳時緩沖液高過液面1-2mm即可。
2)電泳時電壓過高,可以在電泳前15分鐘用較低電壓(3V/cm),等條帶出孔后比較整齊了,再調(diào)高電壓。
3)上樣時盡量慢慢加樣,等樣品自然沉降后再加電壓。
6. 做PCR電泳后跑電泳,目的基因是490 bp,結(jié)果每次切膠回收后再重新電泳條帶就變成接近600 bp了?為什么?
有時只靠電泳結(jié)果判斷是不準(zhǔn)確的,同樣的片段每次跑的遠(yuǎn)近會有不同。有經(jīng)驗顯示目的片段是1300 bp,結(jié)果就跑到1000 bp的Marker下面去了,后來證實片段沒有問題。也有做的一個片段也是這樣,是490 bp理論上兩個條帶一樣,可是PCR結(jié)果顯示就是大小不一致。然后回收以后的檢測結(jié)果又全部都一樣了,后來又拿去做了下一個測序,才知道根本沒有問題。具體問題,具體分析。
關(guān)鍵字: 脲酶;9002-13-5;
伊勢久(江蘇連云港)生物科技有限責(zé)任公司,成立于2019年,坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦,主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運行,其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心,現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品,熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念,聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新,努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅持以客戶為中心,致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù),始終是我們努力的目標(biāo)和方向。