NCI-H3122人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 百歐博偉生物
一、細(xì)胞簡介
平臺(tái)編號(hào):Bio-133625
規(guī)格:1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞信息:NCI-H3122
細(xì)胞名稱:人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
產(chǎn)品類別:人源細(xì)胞系
生長特性:貼壁生長
培養(yǎng)體系:1640 +10%FBS
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
凍存條件:無血清細(xì)胞凍存液
傳代方法:第一次建議1:2傳代 凍存條件 細(xì)胞庫無血清凍存液
細(xì)胞描述:TR鑒定正確本庫的細(xì)胞僅用于科研工作,未經(jīng)許可不得用于其他目的,使用者不得將本庫細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。
培養(yǎng)備注:用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,留作過渡培養(yǎng)
用途:研究
注意事項(xiàng):僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn))
二、細(xì)胞收到后的處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察:未超過80%匯合度時(shí),可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基)
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3、細(xì)胞凍存:
(1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
(2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
(3)用適量的凍存液重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
(4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3、輕輕吹打細(xì)胞,完全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.、按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無菌操作;將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)。
四、處理方法
收到細(xì)胞后,檢查外包裝是否完整,細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題,請即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作:
1、75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2、將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、預(yù)熱培養(yǎng)基(含10%胎牛血清,1%雙抗)。
4、顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(40×,100×,200×各一張)。
5、若細(xì)胞密度較小,無菌操作,去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上,進(jìn)行傳代。
五、實(shí)驗(yàn)操作步驟
a、采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物。
b、立即在無菌超凈臺(tái)內(nèi)用70%乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。
c、用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d、用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部,取出含有胚胎的子宮,置于無菌的培養(yǎng)皿上。
e、剔除胚胎周圍的包膜,將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f、漂洗胚胎,去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
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關(guān)鍵字: NCI-H3122人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 ;百歐博偉生物;
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司(biobw)是北京的一家專業(yè)于生物技術(shù)的研究與廣泛運(yùn)用及推廣的高科技公司,位于北京企業(yè)林立的豐臺(tái)區(qū)造甲街,生物技術(shù)推廣及運(yùn)用早于2011年開始,成立公司于2013年一月。本公司主要提供色譜耗材、色譜儀器、固相萃取裝置、化學(xué)試劑、樣品瓶、氘燈、標(biāo)準(zhǔn)品、微生物技術(shù)、菌種保藏服務(wù)以及ATCC產(chǎn)品代理等產(chǎn)品及服務(wù)。