產品名稱：小鼠脂肪前體細胞3T3F442A
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
小鼠脂肪前體細胞3T3F442A到貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
小鼠脂肪前體細胞3T3F442A培養(yǎng)步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
小鼠脂肪前體細胞3T3F442A部分相關細胞如下：
YS3044 CMT64 小鼠肺腺癌細胞CMT64
YS3045 Tca83 人口腔鱗癌細胞Tca83
YS3046 TE11 人口腔鱗癌細胞TE11
YS3047 HBdSMC 人膀胱平滑肌細胞HBdSMC
YS3048 LPCH12 小鼠肝癌細胞LPCH12
YS3049 NCIH165 人非小細胞肺癌細胞NCIH165
YS3050 CL10 人肺腺癌細胞CL10
YS3051 NCIH498 人結直腸腺癌細胞NCIH498
YS3052 HGSMC 人胃平滑肌細胞HGSMC
YS3053 A1847 人卵巢癌細胞A1847
YS3054 YES2 人食管鱗癌細胞YES2
YS3055 TU177 人喉鱗癌細胞TU177
YS3056 SKRC20 人腎癌細胞SKRC20
YS3057 PANC28 人胰腺癌細胞PANC28
YS3058 OVTOKO 人卵巢透明細胞癌細胞OVTOKO
YS3059 HN6 人舌鱗癌細胞HN6
YS3060 MB39 小鼠腦瘤細胞MB39
YS3061 NCIH2141 人小細胞肺癌細胞NCIH2141
YS3062 EU2 人急性髓系白血病細胞EU2
YS3063 EU4 人急性髓系白血病細胞EU4
YS3064 KM932 人B淋巴細胞KM932
YS3065 OSC19 人舌鱗癌細胞OSC19
YS3066 L78 人肺腺鱗癌細胞L78
YS3067 SUM102PT 人乳腺癌細胞SUM102PT
YS3068 RCF 大鼠心肌成纖維細胞RCF
YS3069 INS1E 大鼠胰島素瘤細胞INS1E
YS3070 CEMT4 人急性T淋巴細胞白血病細胞CEMT4
YS3071 MH22A 小鼠肝癌細胞MH22A
YS3072 NOK 人正常鱗狀上皮細胞NOK
YS3073 THSC 大鼠肝星形細胞THSC
YS3074 SL29 雞胚成纖維細胞SL29
YS3075 KMST6 人胚成纖維細胞KMST6
YS3076 B16BL6 小鼠黑色素瘤細胞B16BL6
YS3077 ST486 人B淋巴瘤細胞ST486
YS3078 639V 人膀胱癌細胞639V
YS3079 HSC6 人口腔鱗癌細胞HSC6
YS3080 End1E6E7 人子宮頸內膜細胞End1E6E7
YS3081 NCIH125 人非小細胞肺癌細胞NCIH125
YS3082 HSAS4 人皮膚成纖維細胞HSAS4
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