產(chǎn)品名稱：人小細胞肺癌細胞NCIH250
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
人小細胞肺癌細胞NCIH250收到貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人小細胞肺癌細胞NCIH250操作步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人小細胞肺癌細胞NCIH250部分相關細胞如下：
YS3112 PG 人巨細胞肺癌細胞PG
YS3113 MAC1 人皮膚T淋巴瘤細胞MAC1
YS3114 HSKMC 人骨骼肌細胞HSKMC
YS3115 LWRN 小鼠皮下結(jié)締組織細胞LWRN
YS3116 IFRS1 大鼠雪旺細胞IFRS1
YS3117 S37 小鼠肉瘤細胞S37
YS3118 ZYMSVEC01 豬靜脈血管內(nèi)皮細胞ZYMSVEC01
YS3119 SCC154 人舌鱗癌細胞SCC154
YS3120 CG4 大鼠少突膠質(zhì)前體細胞CG4
YS3121 T98 人腦膠質(zhì)細胞瘤細胞T98
YS3122 MA782 小鼠乳腺癌細胞MA782
YS3123 SR786 人間變性大細胞淋巴瘤細胞SR786
YS3124 HEML 人表皮黑色素細胞HEML
YS3125 Co115 人結(jié)腸腺癌細胞Co115
YS3126 KP2 人胰腺癌細胞KP2
YS3127 hRPTC 人近端腎小管上皮細胞hRPTC
YS3128 COLO829 人皮膚黑色素瘤細胞COLO829
YS3129 CaES17 人食管癌細胞CaES17
YS3130 SEG1 人食管腺癌細胞SEG1
YS3131 OVCAR5 人卵巢癌細胞OVCAR5
YS3132 ACCM 人涎腺癌細胞ACCM
YS3133 UMUC14 人腎癌細胞UMUC14
YS3134 CNE2Z 人鼻咽癌細胞CNE2Z
YS3135 MIMVEC 小鼠腸黏膜微血管內(nèi)皮細胞MIMVEC
YS3136 MUSM1 小鼠小腸平滑肌細胞MUSM1
YS3137 SNU354 人肝癌細胞SNU354
YS3138 HUCEC 人正常宮頸上皮細胞HUCEC
YS3139 C57B6L 小鼠肺成纖維細胞C57B6L
YS3140 hgf HGF人牙齦成纖維細胞
YS3141 hepg2/LUC 人肝癌細胞-熒光素酶標記HepG2/LUC
YS3142 hmscbm 人骨髓間充質(zhì)干細胞/HMSC-bM
YS3143 u251/LUC 人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞帶熒光素酶U251/LUC
YS3144 mc38/LUC/GFP 小鼠結(jié)腸癌細胞標記MC38/LUC/GFP
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