產品名稱：人結腸癌肝轉移細胞KM12SM
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
人結腸癌肝轉移細胞KM12SM到貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人結腸癌肝轉移細胞KM12SM培養(yǎng)步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人結腸癌肝轉移細胞KM12SM部分相關細胞如下：
YS2487 UPCISCC172 人舌頭鱗癌細胞UPCISCC172
YS2488 stage3ANCIH1373 人肺腺癌細胞stage3ANCI-H1373
YS2489 SW1710 人膀胱癌細胞SW1710
YS2490 12Z 人源子宮內膜異位細胞12Z
YS2491 Y1 小鼠腎上腺皮質瘤細胞Y1
YS2492 PIG3 原代白癜風人皮膚黑色素細胞PIG3
YS2493 P3ag 小鼠骨髓瘤細胞P3ag
YS2494 KM12SM 人結腸癌肝轉移細胞KM12SM
YS2495 MAc 小鼠小腦星形膠質細胞MAc
YS2496 NKT 自然殺傷T細胞NKT
YS2497 MH7A 關節(jié)炎成纖維細胞MH7A
YS2498 RAFLSs 類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞RAFLSs
YS2499 WM239A 人黑色素瘤細胞WM239A
YS2500 GP5D 人結腸腺癌細胞GP5D
YS2501 TGBC11TKB 人胃癌細胞TGBC11TKB
YS2502 HCECB4G12 人角膜內皮細胞HCECB4G12
YS2503 FRTL5 大鼠甲狀腺細胞FRTL5
YS2504 MCA38 小鼠結腸癌細胞MCA38
YS2505 SMC1 人胸膜間皮瘤細胞SMC1
YS2506 HOEC 人口腔上皮HOEC
YS2507 HKF 人成纖維細胞HKF
YS2508 CCCHSF1 人皮膚成纖維細胞CCCHSF1
YS2509 MLM 小鼠急性粒白血病細胞MLM
YS2510 EJ138 人膀胱癌EJ138
YS2511 N9 小鼠小膠質細胞N9
YS2512 BCPAPBCPAP 甲狀腺乳頭狀癌細胞BCPAPBCPAP
YS2513 NCIH1672 小細胞肺癌細胞NCIH1672
YS2514 HSC4 人口腔鱗癌細胞HSC4
YS2515 CEK 雞胚腎細胞CEK
YS2516 NCIH1770 人非小細胞肺癌細胞NCIH1770
YS2517 NCIH1092 人小細胞肺癌細胞NCIH1092
YS2518 FLS 大鼠成纖維樣滑膜細胞FLS
YS2519 HFL 人成纖維樣滑膜細胞HFL
YS2520 HN13 人口腔鱗狀細胞癌細胞HN13
YS2521 MCFs 小鼠心肌成纖維細胞MCFs
YS2522 EHEB 人慢性B細胞白血病細胞EHEB
YS2523 SNK6 人NK/T細胞淋巴瘤細胞SNK6
YS2524 hTERTRPE1 人視網膜色素上皮細胞hTERTRPE1
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