產(chǎn)品名稱：穩(wěn)定表達EBNA1的人胚腎細胞293E
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
穩(wěn)定表達EBNA1的人胚腎細胞293E到貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
穩(wěn)定表達EBNA1的人胚腎細胞293E培養(yǎng)步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
穩(wěn)定表達EBNA1的人胚腎細胞293E部分相關細胞如下：
YS1734 HDFSV40T 人皮膚成纖維細胞（國內建系處理）HDFSV40T
YS1735 MNNGHOSCl5 人骨肉瘤細胞MNNGHOSCl5
YS1736 TMK1 人胃腺癌細胞TMK1
YS1737 HRMVPCSSV40T 人視網(wǎng)膜周細胞HRMVPCSSV40T
YS1738 HRMECSV40T 人視網(wǎng)膜微血管內皮細胞HRMECSV40T
YS1739 HMrSV5 人腹膜間皮細胞HMrSV5
YS1740 HFLSRA 人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞HFLSRA
YS1741 NCIH889 人小細胞肺癌細胞NCIH889
YS1742 NCIH69 人非小細胞肺癌細胞NCIH69
YS1743 SUDHL1 人ALK陽性間變性大細胞淋巴瘤SUDHL1
YS1744 A427 人肺癌細胞A427
YS1745 GM12878 人B淋巴細胞GM12878
YS1746 BPH1 人前列腺增生細胞BPH1
YS1747 HLEB3 人正常眼睛晶狀體上皮細胞美國ATCC斷種HLEB3
YS1748 CAL33 人舌鱗癌細胞CAL33
YS1749 SUDHL16 人ALK陽性間變性大細胞淋巴瘤SUDHL16
YS1750 mdamb231/GFP/LUC 人乳腺癌細胞mdamb231/GFP/LUC
YS1751 mdamb468/GFP/LUC 人乳腺癌細胞mdamb468/GFP/LUC
YS1752 HBL1 人彌漫性大B細胞淋巴瘤HBL1
YS1753 HEK293T懸浮 人胚腎細胞HEK293T懸浮
YS1754 YT 人NK細胞白血病細胞YT
YS1755 94T778 人高分化脂肪肉瘤細胞94T778
YS1756 SNU5 人胃癌細胞SNU5
YS1757 GISTT1 人胃腸道間質瘤細胞GISTT1
YS1758 Mo7e 人巨細胞白血病細胞株Mo7e
YS1759 OCILY10 人B細胞淋巴瘤OCILY10
YS1760 G402 人B細胞淋巴瘤G402
YS1761 HPDE6C7 人正常胰腺導管上皮細胞系HPDE6C7
YS1762 RDES 人尤文氏肉瘤RDES
YS1763 Z138 人套細胞淋巴瘤細胞Z138
YS1764 NCIH747 人盲腸癌細胞/結直腸癌NCIH747
YS1765 SNU620 人胃癌細胞SNU620
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