產品名稱：人骨肉瘤細胞帶紅色熒光143B/RFP
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
人骨肉瘤細胞帶紅色熒光143B/RFP到貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人骨肉瘤細胞帶紅色熒光143B/RFP培養(yǎng)步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人骨肉瘤細胞帶紅色熒光143B/RFP相關細胞如下：
YS2150 RL1 大鼠肺成纖維細胞RL1
YS2151 REM 大鼠胚肌細胞REM
YS2152 RES 大鼠胚皮膚成纖維細胞RES
YS2153 PtK1 袋鼠腎細胞PtK1
YS2154 PtK2 袋鼠腎細胞PtK2
YS2155 DQSHS1 迪慶綿羊皮膚成纖維細胞DQSHS1
YS2156 Mv1lu 貂肺上皮細胞Mv1lu
YS2157 ACTK1 非洲爪蟾腎細胞ACTK1
YS2158 DogL1 狗肺成纖維細胞DogL1
YS2159 NRL2 黑化大家鼠肺成纖維細胞NRL2
YS2160 CatL2 家貓肺成纖維細胞CatL2
YS2161 CatS2 家貓皮膚成纖維細胞CatS2
YS2162 RabbitS1 家兔皮膚成纖維細胞RabbitS1
YS2163 RabbitK3 家兔腎上皮細胞RabbitK3
YS2164 GHS1 金黃地鼠皮膚成纖維細胞GHS1
YS2165 SheepL1 綿羊肺成纖維細胞SheepL1
YS2166 OA3Ts 綿羊胚胎睪丸細胞OA3.Ts
YS2167 JM 人T淋巴細胞白血病細胞JM
YS2168 MT4 人T細胞白血病細胞MT4
YS2169 HFFF2 人包皮成纖維細胞HFFF2
YS2170 801D 人大細胞肺癌細胞801D
YS2171 SnuC1 人結腸癌細胞SnuC1
YS2172 H157 人口腔鱗狀上皮癌細胞H157
YS2173 H33HjA1 人淋巴瘤細胞H33HjA1
YS2174 K562AZQR 人慢性骨髓性白血病細胞(耐藥株)K562AZQR
YS2175 HEL299 人胚肺成纖維細胞HEL299
YS2176 HES 人胚皮膚成纖維細胞HES
YS2177 HH8 人胚腎細胞HH8
YS2178 HEH 人胚心肌細胞HEH
YS2179 SVCT 人乳腺上皮細胞SVCT
YS2180 KPNNS 人腎上腺神經母細胞瘤（腦轉移）KPNNS
YS2181 FHC 人小腸上皮細胞FHC
YS2182 TSEFB 樹鼩胚胎成纖維細胞TSEFB
YS2183 GPL1 豚鼠肺成纖維細胞GPL1
YS2184 GPS5 豚鼠皮膚成纖維細胞GPS5
YS2185 GPH4 豚鼠心肌細胞GPH4
YS2186 KMML1 小白鼠肺成纖維細胞KMML1
YS2187 Sarcoma180 小鼠腹水瘤細胞Sarcoma180
YS2188 FO 小鼠骨髓瘤細胞FO
YS2189 GC2spd 小鼠精母細胞GC2spd
YS2190 P388D1 小鼠淋巴樣瘤細胞P388D1
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