產(chǎn)品名稱：人外周血淋巴細胞MCCAR
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
人外周血淋巴細胞MCCAR貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人外周血淋巴細胞MCCAR培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人外周血淋巴細胞MCCAR相關(guān)細胞如下：
YS2085 OCIAML3 人急性骨髓性白血病細胞OCIAML3
YS2086 ARH77 人外周血淋巴細胞ARH77
YS2087 BC3 人胸膜積液B淋巴細胞BC3
YS2088 CFPAC1 人胰腺導(dǎo)管癌細胞CFPAC1
YS2089 KATOⅢ 人胃腺癌細胞KATOⅢ
YS2090 KHOS240S 人骨肉瘤細胞KHOS240S
YS2091 SJSA1 人骨肉瘤細胞SJSA1
YS2092 A9 小鼠結(jié)締組織L細胞株A9
YS2093 BT 牛鼻甲骨細胞BT
YS2094 LNCaP 人前列腺癌細胞LNCaP
YS2095 HCCLM3 人肝癌細胞HCCLM3
YS2096 EAC 小鼠艾氏腹水癌細胞EAC
YS2097 Hifive(BTITn5B14) 昆蟲細胞Hifive(BTITn5B14)
YS2098 SDM 昆蟲細胞SDM
YS2099 BGE1L15B 昆蟲細胞BGE1L15B
YS2100 JVM2 人外周淋巴細胞（EB病毒感染）JVM2
YS2101 2BS 人二倍體細胞/人胚肺成纖維細胞2BS
YS2102 CCRFSB 人外周血淋巴細胞CCRFSB
YS2103 M210B4 小鼠骨髓纖維原細胞M210B4
YS2104 NCIH441 人肺腺癌細胞NCIH441
YS2105 RBL1 大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞RBL1
YS2106 U14/GFP 小鼠子宮頸癌細胞（/GFP標(biāo)記）U14/GFP
YS2107 LTEPs 人肺鱗癌細胞LTEPs
YS2108 NCTCclone1469 小鼠正常肝細胞NCTCclone1469
YS2109 CRFK 貓腎細胞CRFK
YS2110 MCCAR 人外周血淋巴細胞MCCAR
YS2111 PLA801D95D 人肺巨細胞癌細胞PLA801D95D
YS2112 2B4 人前列腺癌細胞2B4
YS2113 PGBE1 人肺巨細胞癌高轉(zhuǎn)移系PGBE1
YS2114 HeLa229 人宮頸癌細胞HeLa229
YS2115 hEM15A 人子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞細胞hEM15A
YS2116 BV173 人白血病細胞BV173
YS2117 SK6 豬腎細胞SK6
YS2118 RH30 人橫紋肌肉瘤細胞RH30
YS2119 TCYIK 人宮頸小細胞癌細胞TCYIK
YS2120 Hs68 人男性正常龜頭細胞Hs68
YS2121 MV3 人黑色素瘤細胞MV3
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