產(chǎn)品名稱：人雪旺細胞/施萬細胞sNF96.2
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
人雪旺細胞/施萬細胞sNF96.2到貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人雪旺細胞/施萬細胞sNF96.2培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人雪旺細胞/施萬細胞sNF96.2部分相關(guān)細胞如下：
YS1734 HDFSV40T 人皮膚成纖維細胞（國內(nèi)建系處理）HDFSV40T
YS1735 MNNGHOSCl5 人骨肉瘤細胞MNNGHOSCl5
YS1736 TMK1 人胃腺癌細胞TMK1
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YS1739 HMrSV5 人腹膜間皮細胞HMrSV5
YS1740 HFLSRA 人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞HFLSRA
YS1741 NCIH889 人小細胞肺癌細胞NCIH889
YS1742 NCIH69 人非小細胞肺癌細胞NCIH69
YS1743 SUDHL1 人ALK陽性間變性大細胞淋巴瘤SUDHL1
YS1744 A427 人肺癌細胞A427
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YS1746 BPH1 人前列腺增生細胞BPH1
YS1747 HLEB3 人正常眼睛晶狀體上皮細胞美國ATCC斷種HLEB3
YS1748 CAL33 人舌鱗癌細胞CAL33
YS1749 SUDHL16 人ALK陽性間變性大細胞淋巴瘤SUDHL16
YS1750 mdamb231/GFP/LUC 人乳腺癌細胞mdamb231/GFP/LUC
YS1751 mdamb468/GFP/LUC 人乳腺癌細胞mdamb468/GFP/LUC
YS1752 HBL1 人彌漫性大B細胞淋巴瘤HBL1
YS1753 HEK293T懸浮 人胚腎細胞HEK293T懸浮
YS1754 YT 人NK細胞白血病細胞YT
YS1755 94T778 人高分化脂肪肉瘤細胞94T778
YS1756 SNU5 人胃癌細胞SNU5
YS1757 GISTT1 人胃腸道間質(zhì)瘤細胞GISTT1
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YS1760 G402 人B細胞淋巴瘤G402
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YS1764 NCIH747 人盲腸癌細胞/結(jié)直腸癌NCIH747
YS1765 SNU620 人胃癌細胞SNU620
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