中文名：PicoGreen dsDNA 定量檢測試劑盒
英文名：PicoGreen dsDNA Assay Kit
貨號：P266245
包裝：2000t
存儲溫度：避光,-20°C儲存,干燥
產品介紹：
產品介紹
用于?dsDNA?定量檢測的?PicoGreen熒光染料
1.應用說明
在分子生物學的試驗過程中，PicoGreen dsDNA?定量試劑盒是熒光檢測雙鏈?DNA?并進行定量?的一種產品，這種方法非常靈敏。常用于分子生物學技術中的：cDNA?文庫的構建；用于亞克隆的? DNA?片段純化及應用，比如進行?DNA?定量、產物擴增和引物的進一步檢測。?疫苗是現(xiàn)代疾病預防中常用的控制方式。如今許多疫苗是細胞培養(yǎng)疫苗，比如重組乙肝疫苗、狂犬病疫苗等大多數(shù)疫苗都采用細胞培養(yǎng)的方法生產。其中，疫苗的純化是關鍵問題，我們需要盡可能的去除宿主細胞DNA和宿主蛋白。假若宿主細胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人體將會產生不可預料的后果。
常規(guī)的DNA含量的檢測方法是在260nm（A260）處測其吸光值。這種方法的主要缺點是核苷酸、單鏈核酸和蛋白質對信號的影響很大，并且還會受到核酸制備過程中污染物的干擾，無法區(qū)分DNA和RNA，而且這種方法不靈敏（5μg/mLdsDNA溶液A260=0.1）。PicoGreen定量檢測方法簡單、方便，被多家生物制品廠所選擇，成為生物制品殘留DNA檢測的標準。
目前該方法已納入2010年版《中國藥典》原理:
PicoGreen與DNA雙鏈結合后才發(fā)出的熒光，無DNA不發(fā)熒光；所發(fā)熒光與DNA濃度成正比。在2010年《中國藥典》中提出，PicoGreen定量DNA的方法檢出限約0.3ng/ml，DNA含量在1.25-80ng/mL范圍時線性較好(R2>0.99).
優(yōu)點：
1）該方法可以測定來源于任何表達宿主樣品中的雙鏈DNA。
2）可以直接定量PCR擴增產物而無需從反應混合物中純化DNA。
3）遠遠超出傳統(tǒng)紫外A260的檢測方法和Hoechst33258的靈敏度。
4）較高濃度的鹽，尿素，乙醇，氯仿，去垢劑，蛋白或瓊脂糖對測定無影響。
5）在等摩爾濃度?ssDNA?和?RNA?存在的條件下測定?dsDNA，其影響很小。
2.所需器材
? 微型熒光計；便攜式熒光儀-上?；娇茖W儀器有限公司HG-9型；1cm石英比色皿?
? PicoGreen dsDNA 定量檢測試劑盒, 1mL 單位量的試劑濃縮液足夠 2mL 體積的 200 次測定。?
1×TE（10mM Tris 1mM EDTA）pH8.0； 250ug/mL 小牛胸腺DNA
3.實驗方案
試劑制備
PicoGreen dsDNA?定量試劑是以?1mL?的濃縮液形式保存在無水的?DMSO（二甲基亞砜）中。實?驗當天，配制?2XPicoGreen?試劑的操作溶液，用?1xTE?按?1:200?的比例稀釋濃縮液（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH7.5）。如果要準備足夠的操作溶液測定?20?個樣品，可在?20mL1x TE?中加入?100μL PicoGreen dsDNA?定量試劑。由于試劑容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。PicoGreen?試劑?見光易降解，所以應將配好的溶液用箔包住或放置暗處避光保存。
溶液最好在配制好數(shù)小時內使用，以保證最佳結果。
實驗方法：
1).?標準品工作液的配制：
?
小牛胸腺嘧啶DNA干粉1mg（Tris，Nacl等濃度已成標準體系），加入1mL雙蒸水，配制成1mg∕mL的標準品工作液；
2).?染料工作液的配置：
6 uLPicoGreen加入1mL TE(注意：用1×TE將PicoGreen稀釋200倍，現(xiàn)用現(xiàn)配，注意避光)。
3).?標準品工作液稀釋：
（1）母液稀釋：取10ul（1mg∕mL）標準品工作液加入到990ul TE溶液中，濃度稀釋成10ug∕mL，取10ul（10ug∕mL）標準品工作液加入到990ul TE溶液中，濃度稀釋成100ng∕mL；
（2）倍比稀釋：取800ul?（100ng∕mL）的標準品工作液加入到200ul TE溶液中，濃度達到80ng∕mL（藥典規(guī)定：熒光染色方法DNA含量在1.25-80 ng/mL范圍線性較好，?該法DNA檢出限為0.3 ng/ml），取500ul（80ng∕mL）的標準品工作液加入到500ul TE溶液中，濃度稀釋到40ng∕mL；依次倍比稀釋，配成20ng/ml、10ng/ml、5.0ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml的標準品溶液；
4).標準曲線的制備：倍比稀釋后的各梯度標準品溶液和染料工作液各取100ul混勻，避光室溫放置5min。使用FB-15型便攜式熒光儀檢測樣品的熒光值：將混合后的溶液加入微量比色皿，確信不要在樣品中引入氣泡，輕輕地彈微量檢測皿的外部，可以驅散氣泡。以1×TE緩沖液為blank，測定樣品和空白對照的熒光值；用標準品溶液的濃度（ng/ml）對應的熒光強度作直線回歸，制備標準曲線。
5).?測量剩余樣品的熒光值。熒光計將給出一個直接的濃度讀數(shù)，數(shù)據(jù)可以用來產生DNA?濃度的標準曲線。
產品參數(shù)
Ex(nm) 488? ? ? Em(nm) 520
組分
主要包括染料，標準品，緩沖液3個組分
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關鍵字： PicoGreen dsDNA 定量檢測試劑盒;PicoGreen dsDNA Assay Kit
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