中文名：PicoGreen dsDNA 定量檢測(cè)試劑盒

英文名：PicoGreen dsDNA Assay Kit

貨號(hào)：P266245

包裝：2000t

存儲(chǔ)溫度：避光,-20°C儲(chǔ)存,干燥

產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品介紹

用于?dsDNA?定量檢測(cè)的?PicoGreen熒光染料

1.應(yīng)用說明

在分子生物學(xué)的試驗(yàn)過程中，PicoGreen dsDNA?定量試劑盒是熒光檢測(cè)雙鏈?DNA?并進(jìn)行定量?的一種產(chǎn)品，這種方法非常靈敏。常用于分子生物學(xué)技術(shù)中的：cDNA?文庫(kù)的構(gòu)建；用于亞克隆的? DNA?片段純化及應(yīng)用，比如進(jìn)行?DNA?定量、產(chǎn)物擴(kuò)增和引物的進(jìn)一步檢測(cè)。?疫苗是現(xiàn)代疾病預(yù)防中常用的控制方式。如今許多疫苗是細(xì)胞培養(yǎng)疫苗，比如重組乙肝疫苗、狂犬病疫苗等大多數(shù)疫苗都采用細(xì)胞培養(yǎng)的方法生產(chǎn)。其中，疫苗的純化是關(guān)鍵問題，我們需要盡可能的去除宿主細(xì)胞DNA和宿主蛋白。假若宿主細(xì)胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人體將會(huì)產(chǎn)生不可預(yù)料的后果。

常規(guī)的DNA含量的檢測(cè)方法是在260nm（A260）處測(cè)其吸光值。這種方法的主要缺點(diǎn)是核苷酸、單鏈核酸和蛋白質(zhì)對(duì)信號(hào)的影響很大，并且還會(huì)受到核酸制備過程中污染物的干擾，無法區(qū)分DNA和RNA，而且這種方法不靈敏（5μg/mLdsDNA溶液A260=0.1）。PicoGreen定量檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、方便，被多家生物制品廠所選擇，成為生物制品殘留DNA檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)。

原理:

PicoGreen與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出的熒光，無DNA不發(fā)熒光；所發(fā)熒光與DNA濃度成正比。在2010年《中國(guó)藥典》中提出，PicoGreen定量DNA的方法檢出限約0.3ng/ml，DNA含量在1.25-80ng/mL范圍時(shí)線性較好(R2>0.99).

優(yōu)點(diǎn)：

1）該方法可以測(cè)定來源于任何表達(dá)宿主樣品中的雙鏈DNA。

2）可以直接定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物而無需從反應(yīng)混合物中純化DNA。

3）遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出傳統(tǒng)紫外A260的檢測(cè)方法和Hoechst33258的靈敏度。

4）較高濃度的鹽，尿素，乙醇，氯仿，去垢劑，蛋白或瓊脂糖對(duì)測(cè)定無影響。

5）在等摩爾濃度?ssDNA?和?RNA?存在的條件下測(cè)定?dsDNA，其影響很小。

2.所需器材

? 微型熒光計(jì)；便攜式熒光儀-上?；娇茖W(xué)儀器有限公司HG-9型；1cm石英比色皿?

? PicoGreen dsDNA 定量檢測(cè)試劑盒, 1mL 單位量的試劑濃縮液足夠 2mL 體積的 200 次測(cè)定。?

1×TE（10mM Tris 1mM EDTA）pH8.0； 250ug/mL 小牛胸腺DNA

3.實(shí)驗(yàn)方案

試劑制備

PicoGreen dsDNA?定量試劑是以?1mL?的濃縮液形式保存在無水的?DMSO（二甲基亞砜）中。實(shí)?驗(yàn)當(dāng)天，配制?2XPicoGreen?試劑的操作溶液，用?1xTE?按?1:200?的比例稀釋濃縮液（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH7.5）。如果要準(zhǔn)備足夠的操作溶液測(cè)定?20?個(gè)樣品，可在?20mL1x TE?中加入?100μL PicoGreen dsDNA?定量試劑。由于試劑容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。PicoGreen?試劑?見光易降解，所以應(yīng)將配好的溶液用箔包住或放置暗處避光保存。

溶液最好在配制好數(shù)小時(shí)內(nèi)使用，以保證最佳結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)方法：

1).?標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制：

? 小牛胸腺嘧啶DNA干粉1mg（Tris，Nacl等濃度已成標(biāo)準(zhǔn)體系），加入1mL雙蒸水，配制成1mg∕mL的標(biāo)準(zhǔn)品工作液；

2).?染料工作液的配置：

6 uLPicoGreen加入1mL TE(注意：用1×TE將PicoGreen稀釋200倍，現(xiàn)用現(xiàn)配，注意避光)。

3).?標(biāo)準(zhǔn)品工作液稀釋：

（1）母液稀釋：取10ul（1mg∕mL）標(biāo)準(zhǔn)品工作液加入到990ul TE溶液中，濃度稀釋成10ug∕mL，取10ul（10ug∕mL）標(biāo)準(zhǔn)品工作液加入到990ul TE溶液中，濃度稀釋成100ng∕mL；

（2）倍比稀釋：取800ul?（100ng∕mL）的標(biāo)準(zhǔn)品工作液加入到200ul TE溶液中，濃度達(dá)到80ng∕mL（藥典規(guī)定：熒光染色方法DNA含量在1.25-80 ng/mL范圍線性較好，?該法DNA檢出限為0.3 ng/ml），取500ul（80ng∕mL）的標(biāo)準(zhǔn)品工作液加入到500ul TE溶液中，濃度稀釋到40ng∕mL；依次倍比稀釋，配成20ng/ml、10ng/ml、5.0ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

4).標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：倍比稀釋后的各梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液和染料工作液各取100ul混勻，避光室溫放置5min。使用FB-15型便攜式熒光儀檢測(cè)樣品的熒光值：將混合后的溶液加入微量比色皿，確信不要在樣品中引入氣泡，輕輕地彈微量檢測(cè)皿的外部，可以驅(qū)散氣泡。以1×TE緩沖液為blank，測(cè)定樣品和空白對(duì)照的熒光值；用標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度（ng/ml）對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度作直線回歸，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5).?測(cè)量剩余樣品的熒光值。熒光計(jì)將給出一個(gè)直接的濃度讀數(shù)，數(shù)據(jù)可以用來產(chǎn)生DNA?濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

產(chǎn)品參數(shù)

Ex(nm) 488? ? ? Em(nm) 520

組分

主要包括染料，標(biāo)準(zhǔn)品，緩沖液3個(gè)組分

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