產(chǎn)品名稱：人逆轉錄病毒包裝細胞293亞型PlatE293
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
人逆轉錄病毒包裝細胞293亞型PlatE293收到后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人逆轉錄病毒包裝細胞293亞型PlatE293培養(yǎng)步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人逆轉錄病毒包裝細胞293亞型PlatE293部分相關細胞如下：
YS1459 Kyse520 人食管鱗癌細胞Kyse520
YS1460 HS5 人骨髓基質細胞HS5
YS1461 HSC3 人口腔鱗狀癌細胞HSC3
YS1462 MUTZ1 人骨髓增生異常綜合征細胞株MUTZ1
YS1463 KYSE180 人食管鱗狀細胞癌KYSE180
YS1464 SRA0104 人晶體上皮細胞SRA0104
YS1465 KYSE140 人食管鱗狀細胞癌KYSE140
YS1466 WSUDLCL2 人彌漫大B淋巴瘤細胞WSUDLCL2
YS1467 RT112 人膀胱癌細胞RT112
YS1468 JIMT1 人乳腺癌細胞ER陰性（浸潤性乳腺導管癌）JIMT1
YS1469 NUGC3 人胃癌細胞NUGC3
YS1470 MOLM13 人急性髓原白血病細胞MOLM13
YS1471 MeWo 人惡性黑色素瘤細胞MeWo
YS1472 NCIH1666 人肺支氣管癌細胞/微浸潤肺腺癌NCIH1666
YS1473 NCIH2122 人肺腺癌細胞NCIH2122
YS1474 NB4 人急性早幼粒白血病細胞NB4
YS1475 HEK293TACE2 人胚腎細胞穩(wěn)轉ACE2過表達HEK293TACE2
YS1476 RPMI2650 人鼻腔上癌細胞/頭頸部鱗狀細胞癌RPMI2650
YS1477 OCILY3 人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞OCILY3
YS1478 ExpiHEK293F 人胚腎細胞ExpiHEK293F
YS1479 NCIH522 人肺癌細胞NCIH522
YS1480 SNU16 人胃癌細胞SNU16
YS1481 FTC133 人甲狀腺癌細胞FTC133
YS1482 GCIY 人胃癌細胞GCIY
YS1483 Hce8693 人盲腸腺癌細胞(未分化)Hce8693
YS1484 LC2AD 人肺癌腺癌細胞LC2AD
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