Cell Counting Kit-8（CCK-8）細(xì)胞增殖試劑盒

儲(chǔ)存條件：4℃避光保存，長(zhǎng)期儲(chǔ)存置于-20℃，有效期見(jiàn)外包裝。

產(chǎn)品介紹：

Cell Counting Kit-8簡(jiǎn)稱(chēng)CCK8（或WST-8）試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4- 二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）顯色反應(yīng)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。 

WST-8 工作原理：在電子耦合試劑存在的條件下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物 （formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定 OD 值，間接反映 活細(xì)胞數(shù)量。 

WST-8 是 MTT 的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和 MTT 或其它 MTT 類(lèi)似產(chǎn)品如 XTT、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，MTT 被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的甲臜不是水溶性的，需要有特定的溶解液來(lái)溶解；而 WST-8、XTT 和 MTS 產(chǎn)生的甲臜 都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8 產(chǎn)生的甲臜比 XTT 和 MTS 產(chǎn)生的甲臜更易溶解。再次，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8 與 MTT、XTT 相比線性范圍更寬，靈敏度更高。 

CCK 法廣泛應(yīng)用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測(cè)等方面。

使用方法：

1. 細(xì)胞活性檢測(cè)

（1）在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液（100 μL/孔），建議可以設(shè)置 8 個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每個(gè)濃度設(shè)置 6 個(gè)重復(fù)進(jìn)行細(xì)胞鋪板， 例如按照細(xì)胞個(gè)數(shù) 0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96 孔板進(jìn)行鋪板。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜（37℃, 5% CO2）。

（2）向每孔加入 10 μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù)）。 注：如產(chǎn)品有析出，可 37℃水浴處理，不影響使用。 

（3）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 0.5 - 4 h。 注：初次實(shí)驗(yàn)可以在 0.5、1、2 和 4 h 后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 

（4）用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450 nm 和 600 nm（消除孔板本底干擾）處的吸光度。 （5）若暫時(shí)不測(cè)定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并將培養(yǎng)板在室溫條件下避 光保存。24 h 內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

示例：

圖 1. CCK 8 檢測(cè) HeLa 細(xì)胞活性

2. 細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)

（1）在 96 孔板中接種 100 μL 的細(xì)胞懸液，建議可以設(shè)置 8 個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每個(gè)濃度設(shè)置 6 個(gè)重復(fù)進(jìn)行細(xì)胞鋪板，例如 按照細(xì)胞個(gè)數(shù) 0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96 孔板進(jìn)行鋪板。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜（37℃, 5% CO2）

（2）向培養(yǎng)板加入 1 - 10 μL 特定的藥物刺激。 

（3）于培養(yǎng)箱中孵育一段時(shí)間（例如：6、12、24 或 48 h）。

（4）向每孔加入 10 μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù)）。 注：如產(chǎn)品有析出，可 37℃水浴處理，不影響使用。

（5）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 0.5 – 4 h。 注：初次實(shí)驗(yàn)可以在 0.5、1、2 和 4 h 后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

（6）用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450 nm 和 600 nm（消除孔板本底干擾）處的吸光度。

（7）若暫時(shí)不測(cè)定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室 溫條件下。24 h 內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

注：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加 CCK 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然 后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的 空白吸收即可。

3. 計(jì)算公式

細(xì)胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]x100% 抑制率 =[(Ac-As)/(Ac-Ab)]x100% As:實(shí)驗(yàn)孔(含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、CCK-8、待測(cè)藥物)的吸光度 Ac:對(duì)照孔(含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、CCK-8、沒(méi)有待測(cè)藥物)的吸光度 Ab:空白孔(不含細(xì)胞和待測(cè)藥物的培養(yǎng)基、CCK-8)的吸光度

注意事項(xiàng)

1. 使用前請(qǐng)將產(chǎn)品瞬時(shí)離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2. 使用96孔進(jìn)行細(xì)胞鋪板，如果培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)， 一定要注意蒸發(fā)問(wèn)題。建議采取棄用周?chē)蝗Φ霓k法，改加相同量的PBS、 水或者培養(yǎng)液。 

3. 用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。 

4. 本產(chǎn)品僅限于科研，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。 

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。