產(chǎn)品名稱(chēng)：人胰腺癌細(xì)胞JF305
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無(wú)血清凍存液（貨號(hào)：C7001） |
細(xì)胞描述 | 本庫(kù)的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無(wú)菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過(guò)渡培養(yǎng) |
人胰腺癌細(xì)胞JF305收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人胰腺癌細(xì)胞JF305操作步驟
一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶(hù)收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
三、細(xì)胞凍存：（注：無(wú)血清凍存液凍存細(xì)胞的方法請(qǐng)參考我司官網(wǎng)貨號(hào)：C7001）
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人胰腺癌細(xì)胞JF305部分相關(guān)細(xì)胞如下：
YS1126 HFOB119 人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞HFOB1.19
YS1127 HGC27 人胃癌細(xì)胞未分化癌HGC27
YS1128 HGC27YFP 人胃癌細(xì)胞黃色熒光標(biāo)記HGC27YFP
YS1129 HK2 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞HK2
YS1130 HKb20 人腎上皮細(xì)胞HKb20
YS1131 HL60 人早幼粒白血病細(xì)胞HL60
YS1132 HL7702 人肝細(xì)胞HL7702
YS1133 HMC3 人小膠質(zhì)細(xì)胞HMC3
YS1134 HMEC1 人包皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞有限細(xì)胞系HMEC1
YS1135 HO8910PM 人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞HO8910PM
YS1136 HOS 人骨肉瘤細(xì)胞HOS
YS1137 HPAC 人胰腺癌細(xì)胞HPAC
YS1138 HPAFⅡ 人胰腺癌細(xì)胞HPAFⅡ
YS1139 HPASMC 人肺動(dòng)脈平滑肌HPASMC
YS1140 hTERTHPNE 人胰腺導(dǎo)管細(xì)胞hTERTHPNE
YS1141 HS578T 人乳腺癌細(xì)胞（三陰性）HS578T
YS1142 HS683 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞HS683
YS1143 HS746t 人胃腺癌細(xì)胞HS746t
YS1144 HSFSV40T 人真皮成纖維細(xì)胞（SV40轉(zhuǎn)染）（包皮，皮膚，眼瞼皮都有）HSFSV40T
YS1145 HT1080 人纖維肉瘤細(xì)胞HT1080
YS1146 HT1376 人膀胱癌細(xì)胞HT1376
YS1147 HT29 人結(jié)腸癌細(xì)胞HT29
YS1148 HTMC 人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞HTMC
YS1149 HuCCT1 人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞HuCCT1
YS1150 huh6 人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞huh6
YS1151 huh7 人肝癌細(xì)胞huh7
YS1152 huh7(無(wú)突觸) 人肝癌細(xì)胞huh7(無(wú)突觸)
YS1153 huh7（有突觸） 人肝癌細(xì)胞huh7（有突觸）
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