中文名：PE Antibody Labeling Kits（PE抗體標(biāo)記試劑盒）
英文名：PE antibody labeling kits
貨號(hào)：P598273
包裝：100μg、500μg、50μg
存儲(chǔ)溫度：避光,-20°C儲(chǔ)存
產(chǎn)品介紹：
PE抗體標(biāo)記可以兼容NaN3、低濃度的甘油、Tris和甘氨酸。試劑盒里提供的微型超濾離心管可以在標(biāo)記前快速去除不兼容的小分子抗體穩(wěn)定劑。
組分：
注意事項(xiàng)：
1. 管子從冰箱拿出需先恢復(fù)至室溫，再揭開管子封口膜打開產(chǎn)品，避免產(chǎn)品回潮，影響產(chǎn)品使用效果。
應(yīng)用范圍：
抗體標(biāo)記
使用方法：
PE 抗體標(biāo)記試劑盒適合標(biāo)記抗體。我們不建議標(biāo)記其他蛋白質(zhì)，因?yàn)闃?biāo)記的 DOL（degree of labeling）可能達(dá)不到較好值。
檢查你的抗體與抗體兼容性指南。如果你的一抗是商業(yè)產(chǎn)品，請(qǐng)聯(lián)系供應(yīng)商以獲取抗體濃度和配方。不含穩(wěn)定劑的抗體溶液可以得到較好的標(biāo)記結(jié)果，而標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)記步驟可以兼容低濃度的 Tris 和甘油，標(biāo)記液不受 NaN3的影響。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)記步驟（B），根據(jù)需要標(biāo)記的抗體的 μg 數(shù)量選擇試劑盒的規(guī)格。去除非蛋白成分如 Tris、甘氨酸或甘油，可以用試劑盒中提供的超濾管來純化您的抗體，步驟如下（A）。
標(biāo)記效率較高的抗體濃度為 1 mg/mL。超濾管可用于濃縮抗體（或清洗抗體）。為定量未知濃度的抗體，UElandy 提供WonderOrange? 蛋白質(zhì)定量試劑盒（W6006），一種高度敏感性的蛋白質(zhì)熒光定量測(cè)定試劑盒。如果不需要去除或濃縮抗體，則按照標(biāo)準(zhǔn)步驟（B）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
A. 超濾步驟
重要：在您開始之前，對(duì)照表 1（抗體兼容性和標(biāo)記步驟選擇指南）確定您的抗體在標(biāo)記前是否需要超濾。如果有必要，聯(lián)系抗體廠家了解抗體和抗體穩(wěn)定劑的濃度。如果您的抗體不需要超濾，根據(jù)表 1 選擇合適的標(biāo)記步驟。超濾膜截留的分子量為 10 kDa，因此，小于 10 kDa 將可以通過膜，而分子大于 10 kDa 的，包括抗體，將保留在超濾管中（圖 1）。注意不要用吸管觸碰膜，這會(huì)撕裂或穿刺膜，導(dǎo)致抗體損失。
超濾管性能
最大樣本體積：500 μL 最終濃縮體積：15-20 μL
濾液接收器體積：500 μL
滯留體積（膜/支持）：< 5 μL
1. 添加適量的抗體至超濾管中，小心不要觸碰膜。14000 ×g 離心 2 min，使液體過濾進(jìn)收集管，去除收集管中的液體。
2. 對(duì)于濃縮抗體，進(jìn)行第 3 步。對(duì)于純化抗體，加入等體積 1× PBS（PH 7.2）至超濾管中。14000 ×g 離心 2 min 使液體過濾進(jìn)收集管，去除收集管中的液體。重復(fù)清洗 2-3 次。
3. 添加適當(dāng)體積的 1× PBS（PH 7.2）至超濾管中，使得最終的抗體濃度為 1 mg/mL，小心吹吸 PBS 以重懸抗體。
4. 將上述超濾管倒放入新的收集管中，1000 ×g 離心 2 min，將收集管中的抗體轉(zhuǎn)移至干凈的 EP 管中。
B. 標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)記步驟
重要：在您開始之前，對(duì)照表 1（抗體兼容性和標(biāo)記步驟選擇指南）確定您的抗體組成和濃度是否適用于該試劑盒標(biāo)記，以及哪種標(biāo)記步驟適合您選擇。如果有必要，聯(lián)系抗體廠家了解您的抗體和抗體穩(wěn)定劑的濃度。
1. 抗體濃度 1 mg/mL 是較合適的標(biāo)記濃度。如果抗體是凍干形式或濃度更濃，用 1× PBS（PH 7.2）溶解或稀釋抗體。將需要標(biāo)記的抗體轉(zhuǎn)移到干凈的管子里。確保待標(biāo)記的抗體量匹配試劑盒的標(biāo)記范圍。
2. 將 Linking Reagent 恢復(fù)室溫。短暫離心試劑管將粉末集中到底部。
3. 將抗體（1 mg / mL）轉(zhuǎn)移至含有 Linking Reagent 的管中，溶解混勻，室溫（20-25℃）搖晃反應(yīng) 1h。
4. 將上步的溶液全部轉(zhuǎn)移至超濾管中，加入 200 μL 1× PBS（PH 7.2），14000 ×g 離心 2 min?？贵w將殘留在超濾管中，丟棄收集管中的液體。
5. 重復(fù)清洗一次。
6. 將上述超濾管倒放入新的收集管中，1000 ×g 離心 2 min，向收集管中加入適量的 1×PBS（PH 7.2），根據(jù)添加到反應(yīng)中的抗體量，將抗體重新懸浮到最終濃度為 1 mg/mL。
7. 將收集管中的抗體轉(zhuǎn)移至含有 Modified PE 的管中溶解混勻。室溫（20-25℃）避光搖晃孵育 4h。
8. 向上步反應(yīng)溶液中加入 1/10 體積的 Storage Buffer，渦旋混勻，室溫（20-25℃）避光搖晃孵育 1h。
9. 修飾好的抗體可直接用于染色，如需-20℃保存，則需另加入等體積甘油。
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關(guān)鍵字： PE Antibody Labeling Kits（PE抗體標(biāo)記試劑盒）;PE antibody labeling kits
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