中文名：DiA（細(xì)胞膜綠色熒光探針）

英文名：DIA (cell membrane green fluorescent probe)

貨號：D598344

包裝：50mg

Cas號：114041-00-8

存儲溫度：2-8°C儲存,避光

產(chǎn)品介紹：

DiA是一種細(xì)胞膜綠色熒光染料，它在細(xì)胞膜中的擴(kuò)散速度比DiO快，并且經(jīng)常和DiI一起使用于細(xì)胞膜雙色標(biāo)記。 DiA染色后可進(jìn)行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他試劑）的固定，但不建議在染色后進(jìn)行透化的過程。此外，在固定透化（室溫下用0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地進(jìn)行質(zhì)膜染色。DiA對固定細(xì)胞的染色效果比DiO好。 以每次使用100 μL染色工作液，染色工作液濃度10 μM計算，50 mg配置為工作液大概可以用63532次。

注意事項：

1. 使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實驗。 2. DiA染色固定的細(xì)胞或組織樣品時，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?dǎo)致熒光背景較高。 2. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

應(yīng)用范圍：

細(xì)胞膜熒光染料；主要用于細(xì)胞成像，細(xì)胞示蹤和追蹤

參數(shù)：

Ex/Em (MeOH) = 491/613 nm?

使用方法:
1. 染色液制備
（1）配制儲液：儲液用無水 DMSO、無水 DMF 或 EtOH 配制，濃度 1~5 mM。DiA 在無水 DMSO 和無水 DMF 中的溶解度比在 EtOH 中的溶解度高。
注：a.未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復(fù)凍融；
b.發(fā)現(xiàn)較難溶解時可以適當(dāng)加熱，并用超聲處理以促進(jìn)溶解。
（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS 或 PBS）稀釋儲液，配制濃度為 1~30 μM 的工作液。最常用的工作液濃度為 5-10 μM。
注：工作液最終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的 10 倍范圍內(nèi)開始最優(yōu)濃度的摸索。
2. 懸浮細(xì)胞染色
（1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為 1×106/mL。
（2）37℃孵育細(xì)胞 2~20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以 20 min 作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。
（3）孵育結(jié)束，1000~1500 rpm 離心 5 min。傾倒上清液，再次緩慢加入 37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。
（4）重復(fù)步驟（3）兩次以上。
3. 貼壁細(xì)胞染色
（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。
（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，但要使表面保持濕潤。
（3）在蓋玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
（4）37℃孵育細(xì)胞 2~20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?20 min 作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。
（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片 2~3 次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育 5~10 min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤。
4. 結(jié)果檢測
樣品可在培養(yǎng)基中進(jìn)行檢測，可通過熒光顯微鏡成像或流式細(xì)胞儀分析。

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