小牛胸腺,魚類精子和植物種子的胚等含有豐富的DNA,可作為提取DNA的良好材料。動(dòng)物和植物組織的脫氧核糖核蛋白可溶于水或濃鹽溶液(如1mol/L氯化鈉溶液),但在0.14mol/L鹽溶液中的溶解度很低,而核糖核蛋白(RNP)則溶于0.14mol/L鹽溶液中,利用這一性質(zhì)可將脫氧核糖核蛋白與核糖核蛋白以及其他雜質(zhì)分開。制備方法1.取新鮮(或冰凍)的小牛胸腺,除去血水和結(jié)締組織,在冰浴上切成小塊,稱取20g,加入2倍體積的0.1mol/L氯化鈉-0.05mol/L,pH=7.0檸檬酸鈉緩沖溶液,于組織搗碎機(jī)上高速勻漿5分鐘。2.組織糜用轉(zhuǎn)速為;3000r/min的離心機(jī)離心15分鐘,將沉淀用50mL上述緩沖溶液洗滌2次,洗滌時(shí)用勻漿器研磨洗滌,每次如前離心。3.向后得到的細(xì)胞核沉淀中加入6倍體積的10%氯化鈉溶液,充分?jǐn)噭蛑帽渲羞^夜,以充分提取DNP,溶液為粘稠狀。4.將所得的半透明粘稠狀液體,用滴管慢慢注入冷蒸餾水中,邊加邊輕輕攪動(dòng)(NaCl的終濃度為0.14mol/L),這時(shí)有白色絲狀物——核蛋白析出,在冰箱中靜置數(shù)小時(shí),收集沉淀。5.將沉淀物再溶于4倍體積的10%氯化鈉溶液中,迅速攪拌以加速溶解。加入1/2體積的氯仿-異戊醇混合液,劇烈振蕩5分鐘左右,用轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)離心15分鐘,得三層:上層為含有DNA和DNA核蛋白的水層,下層為氯仿-異戊醇的有機(jī)溶劑層,變性蛋白質(zhì)介于兩層之間。6.吸出上面的水層,再用氯仿-異戊醇如前進(jìn)行脫蛋白,直至界面處不再出現(xiàn)變性蛋白質(zhì)為止。7.后吸出上清液并將其注入兩倍體積的95%乙醇中,用玻璃棒攪起白色纖維狀DNA沉淀,瀝干,用80%乙醇洗滌,后用少量無水乙醇洗滌。盡量瀝干乙醇后,鋪開在表面皿上。置于真空干燥器內(nèi)干燥,即得白色纖維DNA鈉鹽。DNA在生物體內(nèi)是以與蛋白質(zhì)形成復(fù)合物的形式存在的,因此提取出脫氧核糖核酸蛋白復(fù)合物(DNP)后,必須將其中的蛋白質(zhì)除去。應(yīng)用用于藥物與DNA相互作用的光譜學(xué)研究;用于聚合酶分析實(shí)驗(yàn)及其它分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。度1.256±0.06g/cm3(Predicted)儲(chǔ)存條件2-8°C酸度系數(shù)(pKa)15.65±0.40(Predicted)
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