中文名：汽巴藍(lán)瓊脂糖（藍(lán)膠）

英文名：Cibacron Blue Agarose

英文別名：Cibacron Blue|84166-13-2|Cibacron Blue 3G-A|Cibacron blue 3GA|1-amino-4-[4-[[4-chloro-6-(2-sulfoanilino)-1,3,5-triazin-2-yl]amino]-3-sulfoanilino]-9,10-dioxoanthracene-2-sulfonic acid|CHEMBL572528|GST Inhibitor-1 (Cibacron Blue 3G-A, Sodium Salt)|1-Amino-

貨號(hào)：C377819

包裝：10ml、1ml、50ml

Cas號(hào)：84166-13-2

存儲(chǔ)溫度：2-8°C儲(chǔ)存

產(chǎn)品介紹：

煙酸藍(lán)瓊脂糖可用于分離需要NAD +和NADP，白蛋白，干擾素，類固醇受體和25-二羥基維生素D3受體的酶。已經(jīng)顯示它可以結(jié)合幾種與核苷酸輔因子具有已知親和力的酶。煙酸藍(lán)瓊脂糖也已顯示出結(jié)合脫氫酶，激酶，限制性核酸內(nèi)切酶，白蛋白和干擾素的能力。

產(chǎn)品性能:

產(chǎn)品使用:
1. 填料準(zhǔn)備
根據(jù)需要由公式：介質(zhì)體積=柱高×截面積×壓縮因子（壓縮因子=1. 15）計(jì)算C377819 介質(zhì)體積；真空抽濾去除介質(zhì)保存溶液，再用超純水反復(fù)抽洗，最后將介質(zhì)用超純水或平衡待用緩沖液混成 50-75%的懸浮液備用（溶液需要經(jīng)過孔徑為 0.45 或0.22μm濾膜過濾并脫氣處理）；或用超純水置換保存液至乙醇含量小于 2% ，然后將介質(zhì)用超純水或平衡待用緩沖液混成 50-75%的懸浮液備用。
2. 層析柱準(zhǔn)備
事先將層析柱消毒、洗凈，用超純水或待用緩沖液沖洗柱壁，并排除層析柱上下兩端適配器中的氣泡，將層析柱底部適配器與柱體連接，關(guān)閉柱底閥門，向?qū)游鲋屑尤?3cm左右高度緩沖液/超純水，靜置 5min ，檢查是否漏液。
3. 裝入柱料
將層析柱固定，連接裝柱器（如果需要），用水平尺校正水平，將上述介質(zhì)懸浮液攪拌均勻，在玻璃棒的引流下，沿層析柱內(nèi)壁一次性裝入，避免引入氣泡；待層析介質(zhì)自然沉降后，層析柱上端適配器連接儀器泵或者蠕動(dòng)泵，排除適配器中氣泡后安裝適配器至膠面上 2-3cm ，避免使介質(zhì)重新懸起。
4. 壓柱
為得到理想柱效，應(yīng)先以較低流速讓液體緩慢流過層析柱，再逐漸增加至最大壓柱流速，確保裝柱時(shí)壓力不超過 0.3MPa ，走流速直至層析柱中膠面高度不再變化，標(biāo)記膠面位置，停泵，將上端適配器壓至標(biāo)記高度下 0.5cm ，鎖緊適配器，封堵出口，完成裝柱。如果使用裝柱器，待裝柱器中的層析介質(zhì)全部壓入柱體內(nèi)，卸下裝柱器，連接柱體上端適配器，將柱頭下降至膠面上 0.5cm ，再次壓柱，標(biāo)記膠面位置，停泵，將上端柱桿下壓至標(biāo)記高度下 0.5cm ，鎖緊適配器，封堵出口，完成裝柱。
5. 柱效測(cè)試
5. 1 柱效測(cè)定
柱效是衡量色譜柱性能的一項(xiàng)重要指標(biāo)，主要有兩種柱效測(cè)試方法：一種是用丙酮，另一種是用氯化鈉；前者是在 UV280nm 條件下測(cè)定紫外吸收峰，后者是考察電導(dǎo)峰。

5.2 柱效計(jì)算（HETP 和 AS 計(jì)算方法）

根據(jù) UV 和電導(dǎo)率曲線計(jì)算理論塔高度（HETP）、理論塔板數(shù)（N）和非對(duì)稱因子
（As），公式如下：
N=5.54(VR/Wh)2
HETP=L/N
As=b/a
其中：VR ：保留體積；Wh ：50%峰高處的半峰寬；
VR 和 Wh 的單位應(yīng)一致；L：柱高；N：理論塔板數(shù)；
a/b：將 10％峰高處前半峰的寬度設(shè)為 a, 同高度處后半峰的寬度設(shè)為 b；
5.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)
一般來說，當(dāng) HETP/填料粒徑（dp）=3（或 N>100000/平均粒徑/3），峰的非對(duì)稱因子（As）在 0.8- 1.8 之間，認(rèn)為柱效較高。
6. 清洗
用 0.5- 1.0M NaOH 清洗 2-3CV ，用超純水清洗至中性。
7. 平衡
根據(jù)樣品的穩(wěn)定性、活性、等電點(diǎn)選擇合適的緩沖液、pH 范圍，低 pH 5.5?8.5 和低離子強(qiáng)度 5?50mmol/L 結(jié)合緩沖液能促進(jìn)蛋白的結(jié)合，另外 0.1? 10mmol/L 的金屬離子（如 Mg2+ 、Ca 2+ 、Zn2+ 、Mn2+ 、Cu2+ 、Co2+ 、Fe3+和 Al3+）可以增強(qiáng)蛋白質(zhì)的結(jié)合。層析實(shí)驗(yàn)開始前需測(cè)定結(jié)合緩沖液電導(dǎo)、pH ，以合適的流速平衡層析柱，當(dāng)儀器檢測(cè)電導(dǎo)、pH 值達(dá)到結(jié)合緩沖液的初始值說明層析柱平衡好，一般需要 2~5CV。
8. 上樣
可以用樣品環(huán)或泵等裝置上樣，樣品需經(jīng)孔徑為 0.45 或 0.2μm濾膜過濾并脫氣處理；樣品配制溶液應(yīng)盡可能與結(jié)合緩沖液一致，上樣量根據(jù)動(dòng)態(tài)結(jié)合載量或者實(shí)際測(cè)定載量來確定。
9. 清洗
上樣后繼續(xù)用平衡緩沖液清洗至紫外吸收值回歸基線。
10. 洗脫?

C377819層析介質(zhì)可以使用鹽濃度、pH 兩種洗脫類型，線性梯度、步級(jí)梯度、等度洗脫等方式，可分管收集后確定目的蛋白的洗脫條件。
11. 再生

C377819層析介質(zhì)在一次上樣、洗脫結(jié)束后，為確保下次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性，需用高濃度的鹽，比如 1~2M 氯化鈉沖洗層析柱，特殊情況下也可再用 0.5~ 1M 氫氧化鈉沖洗層析柱，注意，一定要用超純水或結(jié)合緩沖液將層析柱沖洗至離子強(qiáng)度、pH 穩(wěn)定方可繼續(xù)平衡再次使用。

12. 層析柱 CIP（Cleaning In Place）
C377819?在多次使用后，會(huì)結(jié)合并聚集大量雜蛋白，造成柱子堵塞，反壓增大，影響流速與載量，需要定期對(duì)層析柱清洗與再生，根據(jù)純化樣品情況選擇 CIP 方式。
① 選用 2M NaCl 沖洗多個(gè)柱體積以除去結(jié)合能力較強(qiáng)的物質(zhì)；
② 選用 1M NaOH 溶液沖洗多個(gè)柱體積以除去沉淀、疏水性較強(qiáng)物質(zhì)；
③選用 70%乙醇或 30%異丙醇沖洗多個(gè)柱體積以除去脂類物質(zhì)（使用高濃度有機(jī)溶劑時(shí)，為避免氣泡產(chǎn)生，應(yīng)逐步增加有機(jī)溶劑濃度如采取梯度方式）；沖洗結(jié)束后需要用超純水或緩沖液沖洗至電導(dǎo)、pH 穩(wěn)定。
13. 層析介質(zhì)儲(chǔ)存
清潔和再生后的層析介質(zhì)保存于 20%中，建議 4-30℃保存，建議 2-3 個(gè)月更換一次20%乙醇，防止乙醇揮發(fā)導(dǎo)致微生物滋生。

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