新生小鼠原代心肌細胞分離試劑盒
一、產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱 | Applied Cell? 新生小鼠原代心肌細胞分離試劑盒 |
貨 號 | AC-1002016 |
規(guī) 格 | 1kit |
保存條件 | 詳見產(chǎn)品內(nèi)容 |
使用范圍 | 小鼠原代心肌細胞分離培養(yǎng) |
保質(zhì)期 | 12 個月 |
二、產(chǎn)品簡介
新生小鼠心肌細胞分離試劑盒是埃澤思生物科技有限公司（Applied Cell?）開發(fā)的一款用于新生小鼠心臟原代心肌細胞分離和培養(yǎng)的產(chǎn)品。本產(chǎn)品提供一種簡單高效的小鼠原代心肌細胞分離方法，該方法為基于心肌細胞的體外藥物篩選以及藥物評估提供了非常好的原料。在細胞分離中，充分優(yōu)化分離過程， 以及培養(yǎng)試劑，獲得高純度、高活性的原代心肌細胞。使用本試劑盒進行細胞分離、培養(yǎng)的原代心肌細胞， 可表達心肌細胞蛋白標(biāo)記物和保持細胞收縮性。
三、產(chǎn)品特性
l 采用二級消化法，特異性除去非心肌細胞，獲得高純度心肌細胞。
l 細胞貼壁效果更好、活性更高。
l 分離心肌細胞產(chǎn)量更高，損失更少。
四、產(chǎn)品內(nèi)容
試劑 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 保存 |
Wash buffer | 125ml | 2 瓶 | 2-8℃ |
Mouse Cell Dissociation SolutionⅠ | 125ml | 1 瓶 | -20--80℃保存 |
Mouse Cell Dissociation SolutionⅡ | 125ml | 1 瓶 | -20--80℃保存 |
Mouse Cardiomyocytes Medium | 125ml | 2 瓶 | 2-8℃ |
Ready-to-use Gel | 100ml | 1 瓶 | 2-8℃ |
五、實驗準(zhǔn)備
A. 使用 75%酒精擦拭試驗臺；
B. 準(zhǔn)備酒精燈、酒精棉及用于盛放實驗處理后小鼠的垃圾袋；
C. 剪刀、鑷子、微型鑷子等解剖用具需提前進行滅菌處理；
D. 吸取適量 Wash Buffer 至培養(yǎng)皿中并放置于冰上（細胞房內(nèi)操作）。
六、操作方法
1. 取心臟：
A. 左手捏住小鼠背部皮膚，使用酒精棉（95%酒精）擦拭小鼠胸腹，用解剖剪在小鼠劍突處正中線偏 左向上剪開，略壓胸骨，使心臟自然跳出，用彎鑷子勾住心臟根部，取出心臟，置于盛有遇冷 Wash buffer 的培養(yǎng)皿中。
B. 在解剖鏡下使用微型鑷子和解剖剪剪去心房。
2. 組織清洗和預(yù)消化：
A. 經(jīng)酒精擦拭后，將培養(yǎng)皿移入細胞房超凈工作臺，用遇冷的 Wash buffer 清洗 3 次，去除血污后， 將心臟剪成約 1mm3 的組織塊，再清洗 2 次，
3. 將組織塊移入培養(yǎng)瓶中，加入適量 Mouse Cell Dissociation SolutionⅠ后放入 4℃冰箱消化過夜。
注意：預(yù)消化時間可根據(jù)心臟數(shù)目進行調(diào)整，最多不超過 24h。第二天：
1. 實驗準(zhǔn)備：
水浴鍋溫度調(diào)至 37℃，將 Wash Buffer 放入水浴中加熱。把心臟從 4℃冰箱取出并將其中的心臟和消化液移入一個新的 50ml 離心管中，加入等量經(jīng)預(yù)熱的 Wash Buffer, 37℃水浴鍋中搖動消化 1min 后棄上清；
2. 消化：
A. 在 50ml 離心管中加入 5ml Mouse Cell Dissociation SolutionⅡ，37℃水浴中搖動消化 7min 后將上清液加入遇冷的 10ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium 中，混合均勻并置于冰上保持低溫。
注意：每次消化液使用的量可根據(jù)組織塊的多少進行調(diào)整。
B. 重復(fù) 2.A 的步驟直至組織完全消化。注意：吸取上清時盡量避免吸出沉淀。
C. 將收集的上清在常溫下 1200rpm，離心 5min。輕輕吸除上清，用 Mouse Cardiomyocytes Culture Medium 重懸細胞。
3. 差速貼壁：
A. 將重懸的細胞經(jīng)過 100μm 濾網(wǎng)過濾，直接接種到培養(yǎng)皿中，放入細胞培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2） 中孵育 60-75min。
B. 取上清移至新的培養(yǎng)皿中，重新放入細胞培養(yǎng)箱中孵育 60-75min。注意：孵育時間根據(jù)培養(yǎng)皿貼壁能力可做適當(dāng)調(diào)整；
4. 細胞鋪板：
A. 將 Mouse Cardiomyocytes Culture Medium 預(yù)先在 37℃水浴中加熱。
B. 取出培養(yǎng)皿，將上清移入 15ml 離心管中，1200rpm，離心 5min，輕輕吸除上清，用已經(jīng)預(yù)先加熱至 37℃的 2ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium 重懸細胞。
C. 利用血細胞計數(shù)板進行細胞計數(shù)，用臺盼藍檢測細胞存活率。
D. 根據(jù)所計的細胞數(shù)量使用 Mouse Cardiomyocytes Culture Medium 進行稀釋調(diào)整細胞濃度， 將細胞移至包被好的孔板或培養(yǎng)皿中。
E. 將培養(yǎng)皿放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h 后觀察細胞狀態(tài)，若細胞狀態(tài)佳且濃度合適，則可進行后續(xù)實驗。
七、細胞形態(tài)圖
小鼠原代心肌細胞熒光染色
關(guān)鍵字： 小鼠原代心肌細胞分離培養(yǎng);心肌細胞分離;小鼠心臟原代心肌細胞;小鼠原代細胞試劑盒;上海埃澤思;
埃澤思生物總部位于上海，公司取名Applied Cell(應(yīng)用細胞)，是一家致力于為細胞治aize 療、再生埃澤思生物總部位于上海，公司取名AppliedCell(應(yīng)用細胞)，是一家致力于為細胞治療、再生醫(yī)學(xué)提供核心原料，以及研發(fā)服務(wù)（CRO ）和生物藥委托開發(fā)生產(chǎn)服務(wù)（CDMO）的生物科技公司。目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細胞、免疫細胞治療全流程試劑原料。其中核心產(chǎn)品已經(jīng)完成美國FDADMF備案以及國家藥品評審中心（CDE）藥物原輔料備案，是國內(nèi)資質(zhì)最為齊全的細胞治療原料供應(yīng)商之一。目前，公司已與國內(nèi)6家細胞治療企業(yè)進行細胞治療一類新藥聯(lián)合申報，一項日本一類新藥聯(lián)合申報。