【藥典規(guī)定的支原體檢查法】
支原體嚴(yán)重影響培養(yǎng)中的細胞的表型特征和正常生長,給藥品質(zhì)量安全控制帶來了極大的風(fēng)險。因此,細胞培養(yǎng)過程中的支原體檢測非常必要。FDA、WHO等不同國家和地區(qū)監(jiān)管機構(gòu)和USP、EP、ChP等法規(guī)均有支原體檢查的規(guī)定,主要包括測試細胞庫(主細胞庫、工作細胞庫),收獲前的下游細胞培養(yǎng)物,終產(chǎn)品及對照細胞等是否存在支原體污染。
《中國藥典》2020版第三部3301支原體檢查法中規(guī)定,主細胞庫(MCB)、工作細胞庫(WCB)、病毒種子批、對照細胞以及臨床治療用細胞應(yīng)進行支原體檢查?,F(xiàn)行《中國藥典》規(guī)定的方法仍然是直接培養(yǎng)法和指示細胞法(DNA染色法), 這兩種方法周期較長(直接培養(yǎng)法21天,指示細胞法3-4天),無法滿足藥物放行的時間要求。
《歐洲藥典》除了這兩種方法法外,還推薦核酸檢測法(NAT法)。同時規(guī)定,經(jīng)過合理的方法學(xué)驗證,NAT法可用于替代直接培養(yǎng)法(10cfu/mL)和指示細胞法(100cfu/mL)。
【支原體qPCR檢測試劑盒已完成方法學(xué)驗證】
上海公司委托第三方專業(yè)檢測機構(gòu)完成了細胞支原體檢測試劑盒方法學(xué)驗證!該驗證項目依據(jù)歐洲藥典推薦的核酸檢測支原體檢查法驗證方案,對試劑盒的專屬性、檢測限和耐用性進行了驗證。結(jié)果表明,細胞支原體檢測試劑盒這三方面特性均符合要求,檢測靈敏度為10cfu/mL,可替代培養(yǎng)法,用于細胞存儲庫、細胞治療用途的細胞和生物制品中支原體污染檢測和放行檢測。
【產(chǎn)品規(guī)格】
【產(chǎn)品說明】
本產(chǎn)品試劑盒采用雙色熒光qPCR(TaqMan探針法)檢測支原體DNA,檢測對象為細胞培養(yǎng)的上清液或細胞本身。該試劑盒具有以下特點:
?? 1.靈敏:100拷貝的支原體可被檢出。
?? 2.穩(wěn)定:全程閉管操作,無交叉污染。
?? 3.可靠:含內(nèi)參基因,避免假陰性。
?? 4.方便:操作簡單,無需電泳步驟。
?? 5.定量:以CT值判斷,可定量檢測。
【運輸及保存條件】
??低溫冷凍運輸, -20℃保存,有效期1年。
【產(chǎn)品組分】
注:本試劑盒提供試劑,使用前先低速離心、后小心開啟。使用時請上下輕柔顛倒十次混勻,避免起泡,并低速短暫離心后使用。
【操作步驟】
??1. 細胞樣品制備,取 1~1.5mL 細胞培養(yǎng)上清,1000 rpm 離心3 分鐘, 取 2μL上清作為模板備用;
??2. 根據(jù)支原體檢測說明書進行混合試劑,配置檢測體系;
3. 將反應(yīng)罐放置再熒光PCR擴增儀上,根據(jù)產(chǎn)品說明書上的反應(yīng)條件進行反應(yīng)。
關(guān)鍵字: 細胞;支原體;細胞污染;支原體檢測;
上海松茸生物科技有限公司是一家從事生物服務(wù),技術(shù)咨詢,技術(shù)轉(zhuǎn)讓等業(yè)務(wù)的公司,成立于2009年04月28日,公司坐落在上海市。專注于為國內(nèi)生物醫(yī)藥企業(yè)提供細胞質(zhì)控類、健康檢測類類的服務(wù)與產(chǎn)品。