欲實(shí)現(xiàn)抗體在體內(nèi)達(dá)到一定的治療效果，抗體的親和力須達(dá)到一定的水平。然而，在很多情況下，想同時(shí)獲得既具有良好的生物活性又具有高親和力的抗體并不是一件容易的事。在這種情況下，提高已有抗體與抗原的親和力便是藥物研發(fā)的選擇。另外，經(jīng)過(guò)人源化改造后的抗體的親和力一般會(huì)下降，因此，將人源化抗體的親和力回復(fù)到人源化改造之前或更高的水平是非常有必要的，親和力成熟技術(shù)便是常常被用來(lái)提高抗體與抗原親和力的技術(shù)。義翹神州提供的抗體親和力成熟服務(wù)能夠?qū)⒖贵w的親和力提高到一個(gè)理想水平。

常用的抗體體外親和力成熟技術(shù)

根據(jù)體內(nèi)抗體親和力成熟原理，在體外抗體親和力成熟過(guò)程中，選擇突變區(qū)域以及如何引入突變是一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題，目前的突變策略主要分為三大類(lèi)，隨機(jī)突變、置換和定向突變。

①易錯(cuò)PCR

易錯(cuò)PCR是目前最常用的抗體突變技術(shù)，可以在抗體基因的全長(zhǎng)或部分區(qū)域隨機(jī)引入突變。在聚合酶對(duì)目的基因擴(kuò)增時(shí)，通過(guò)應(yīng)用錯(cuò)配率高的聚合酶或調(diào)整反應(yīng)條件等，以一定的頻率向目的基因中隨機(jī)引入突變，并通過(guò)多輪PCR反復(fù)進(jìn)行隨機(jī)誘變，累計(jì)突變效應(yīng)，最終獲得目的蛋白的隨機(jī)突變體。

②鏈置換

鏈置換是保留某個(gè)特定抗體的重鏈或輕鏈，另一條鏈與一個(gè)隨機(jī)化的互補(bǔ)鏈進(jìn)行組合，從中篩選更高活性的突變株。通過(guò)固定抗體兩條鏈中的一條鏈，對(duì)另一條鏈構(gòu)建具有足夠多樣性的置換文庫(kù)，隨機(jī)組合有可能產(chǎn)生鏈組合，經(jīng)過(guò)噬菌體抗體庫(kù)篩選可獲得高親和力的新抗體。鏈置換策略常采用輕鏈替換。

③定點(diǎn)突變

由于天然抗體在親和力成熟過(guò)程中，體細(xì)胞高頻突變發(fā)生區(qū)域并非均勻分布，而是主要集中在與抗原直接接觸的CDR區(qū)。在抗體的親和力體外成熟過(guò)程中，CDR區(qū)是最常選用的定點(diǎn)突變區(qū)域，這樣既可以獲得足夠的序列多樣性，又不會(huì)破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。對(duì)CDR進(jìn)行定點(diǎn)突變時(shí)，可以對(duì)多個(gè)CDR進(jìn)行平行突變或進(jìn)行逐步優(yōu)化。

DNA改組

DNA改組技術(shù)是對(duì)同源的抗體基因，采用脫氧核糖核酸酶Ⅰ將其切割成不超過(guò)50bp的片段，再隨機(jī)組合后進(jìn)行PCR擴(kuò)增成完成的抗體基因的技術(shù)。它包含了抗體片段隨機(jī)化切割、重組和篩選的過(guò)程，一定程度上模擬了天然抗體的親和力成熟過(guò)程，并加快了體外定向進(jìn)化速度。

義翹神州——抗體親和力成熟服務(wù)的流程

? 抗體序列分析及突變文庫(kù)設(shè)計(jì)

? 丙氨酸突變載體構(gòu)建

? 抗體篩選及親和力鑒定

? 隨機(jī)文庫(kù)構(gòu)建及篩選

? 抗體瞬轉(zhuǎn)表達(dá)及純化

? QC分析

周期：15-21周

交付內(nèi)容：

? 1-3個(gè)經(jīng)親和力優(yōu)化的抗體序列，每個(gè)1-2mg純化抗體

? COA（含純化抗體UV、SDS-PAGE及親和力分析等結(jié)果）

義翹神州——抗體親和力成熟服務(wù)優(yōu)勢(shì)

①豐富的經(jīng)驗(yàn)及多例成功案例

②專(zhuān)業(yè)的抗體數(shù)據(jù)庫(kù)分析系統(tǒng)

③計(jì)算機(jī)建模結(jié)構(gòu)模擬優(yōu)化

④隨機(jī)突變、定點(diǎn)突變技術(shù)

⑤快速、高通量哺乳動(dòng)物細(xì)胞抗體表達(dá)與篩選技術(shù)平臺(tái)

⑥OCTET Affinity, Kinetics, off-rate, ranking

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