復(fù)合體Ⅰ(EC 1.6.5.3)又稱 NADH-CoQ 還原酶或 NADH 脫氫酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞 的線粒體中,是線粒體內(nèi)膜中的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對(duì)電子從 NADH 傳遞給 CoQ,同時(shí)可使 O2 還原生 成 O2-,是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生 O2-的主要部位。測(cè)定該酶活性,不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈(ETC)狀態(tài), 而且可以反映活性氧(ROS)生成狀態(tài)。 復(fù)合體Ⅰ能夠催化 NADH 脫氫生成 NAD+,在 340nm 下測(cè)定 NADH 的氧化速率計(jì)算出該酶活性的大小。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
溶液的配制:
1、 試劑二:臨用前取一支加入 1 mL 丙酮,充分溶解,2-8℃可保存 1 個(gè)月(1 瓶粉劑即可做 100T,為延長(zhǎng) 試劑盒使用時(shí)間,故此產(chǎn)品多給一支);
2、 試劑三:臨用前加入 0.1mL 丙酮,丙酮易揮發(fā),使用完畢后注意封口,-20℃可保存 2 個(gè)月;
3、 試劑三工作液:臨用前根據(jù)用量將試劑三:丙酮=5μL:0.5mL(約 50T)混合備用,現(xiàn)用現(xiàn)配;
4、 試劑四:臨用前取一支加入 1.6mL 蒸餾水(約 100T),充分溶解,-20℃可保存 1 個(gè)月,避免反復(fù)凍融(1 瓶粉劑即可做 100T,為延長(zhǎng)試劑盒使用時(shí)間,故此產(chǎn)品多給一支);
5、 工作液的配制:根據(jù)用量將丙酮:試劑二:試劑三工作液=250μL:250μL:500μL(約 50T)混合備用, 現(xiàn)配現(xiàn)用。
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