吸水鏈霉菌

≥90%（HPLC）；效價≥1050 U/mg

1、 儲存液制備
（1）潮霉素 B（粉末形式）：稱取適量粉末溶于 1×PBS 配制成 50 mg/ml 溶液，用 0.22 μm 濾膜過濾除菌，置于 2-8°C 避光保存。
（2）潮霉素 B（溶液形式）：已是無菌儲存液，直接用細胞培養(yǎng)液稀釋到工作濃度即可使用。
2、 建議工作濃度
潮霉素 B用來篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型、培養(yǎng)基、生長條件和細胞代謝率而變化。
（1）哺乳動物細胞 使用濃度為 50-1000 μg/ml，常用篩選濃度為 200 μg/ml，濃度需要殺滅曲線來確定；
（2）植物細胞常用濃度：20-200 μg/ml；
（3）細菌常用濃度：20-200 μg/ml；
（4）真菌常用濃度：200-1000 μg/ml；
3、 殺滅曲線的建立
建議初次實驗一定要建立殺滅曲線（kill curve），至少設立 5 個濃度，篩選到適合自身實驗體系的濃度。
（1）將未轉(zhuǎn)化細胞按照 20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，鋪足夠的孔以保證后續(xù)的梯度實驗。37℃ 培養(yǎng)過夜；【注意】對于需要更高密度以保證活力的細胞，增加接種量。
（2）第二日，用含梯度濃度潮霉素 B 的培養(yǎng)基替換舊培養(yǎng)基。比如，哺乳動物細胞常用濃度為 50-1000 μg/ml， 可設 50、100、250、500、750、1000 μg/m 這 6 個濃度，各 3 個平行。同時設置一陰性對照，3 個平行。
（3）接下來每 3-4 日更換新鮮的含抗生素培養(yǎng)基。
（4）按照固定周期（如每 2 天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)化細胞生長的恰當濃度。選擇在理想天數(shù)（通常是 7-10 天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的最低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選所需的工作濃度。
4、 穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞的篩選
（1）轉(zhuǎn)染 48 h 后，用含篩選濃度潮霉素 B 的培養(yǎng)基進行細胞傳代?！咀⒁狻考毎幱诨钴S分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果。當細胞密度過高，篩選效率會降低。為了得到較好的篩選效果，建議將細胞稀釋至豐度不超過25%。
（2）每 3-4 日更換新鮮的含抗生素培養(yǎng)基。
（3）篩選 7 天后觀察并評估細胞集落的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這些取決于宿主細胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
（4）挑取 5-10 個抗性克隆到 35 mm 細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
（5）之后換用正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

粉末-20℃干燥保存，2年有效。
溶液2-8°C避光保存，1年有效。

濕霉素乙

類白色至白色粉末

易溶于水、甲醇、乙醇，易與許多有機酸和無機酸生成鹽。