1.  名稱：

TMB底物液，底物顯色液，ELISA 底物顯色液。

2.  產(chǎn)品描述

用于HRP標(biāo)記的ELISA；單一組分，穩(wěn)定，使用方便，靈敏度高。主要成分是3,3’,5,5’–四甲基聯(lián)苯胺[3,3’,5,5’- tetramethylbenzidine(TMB)],是辣根過氧化物酶（HRP）的底物，在辣根過氧化物酶的作用下，發(fā)生氧化劑反應(yīng)生成藍(lán)色產(chǎn)物。顏色的強(qiáng)弱與HRP的活性呈正比，從而可以用于基于HRP標(biāo)記物的檢測(cè)。

規(guī)格： 100mL, 1000mL, 5000mL

3.  保存及運(yùn)輸：

常溫運(yùn)輸(勿超過30℃)，2-8℃儲(chǔ)存12個(gè)月。

4.  使用方法：

根據(jù)使用的數(shù)量，將該次需要的TMB顯色液從大瓶轉(zhuǎn)移的干凈的避光小瓶中，后續(xù)從小瓶中取用:

1) 加液：加完HRP結(jié)合物并溫育一定時(shí)間后，洗板3-5次，每孔加TMB顯色液100μL - 200μL。  

2) 根據(jù)個(gè)人實(shí)驗(yàn)需要，在室溫（15-25℃）或37°C下溫育10-30分鐘。

3) 終止：加50微升的2M鹽酸或硫酸溶液終止反應(yīng)，孔中反應(yīng)液由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

4) 讀數(shù)：終止反應(yīng)后30分鐘內(nèi)在450nm處讀數(shù)。

如果出現(xiàn)高的反應(yīng)背景或沉淀，表明TMB底物反應(yīng)過于強(qiáng)烈。為了避免產(chǎn)生沉淀，可在終止后馬上

讀數(shù)；或者進(jìn)一步稀釋一抗和/或HRP結(jié)合物

5.  注意事項(xiàng):

1) 適用于HRP標(biāo)記的ELISA實(shí)驗(yàn)，該底物中含TMB和過氧化氫，在HRP的作用下，被氧化形成水溶性藍(lán)色產(chǎn)物，在370nm和650nm有吸收峰。進(jìn)行動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)，可直接檢測(cè)650 nm的吸光度。由于藍(lán)色會(huì)不斷加深，推薦及時(shí)加入終止液，加入酸性終止液后溶液變成穩(wěn)定的黃色，檢測(cè)波長為450 nm，吸光度值可較不終止增加數(shù)倍且保持穩(wěn)定。

2) 該底物對(duì)微量的HRP酶敏感，在使用過程中應(yīng)避免污染，切忌將槍頭直接插入大瓶中取液。一旦未使用的顯色液變藍(lán)了，說明試劑遭到污染，需停止使用。

3) 操作過程中避免陽光的直射，分裝的容器建議用塑料容器，避免使用金屬容器以及細(xì)菌和氧化還原劑污染的容器。

4) 大量分裝時(shí)使用稱重的方法或蠕動(dòng)泵。

5) 過高濃度的HRP會(huì)導(dǎo)致TMB呈現(xiàn)綠色或紅色，或終止后出現(xiàn)沉淀，應(yīng)該減少抗體和標(biāo)記物的用量或縮短孵育時(shí)間。

6) 本品的靈敏度和信號(hào)水平可能優(yōu)于客戶目前正在使用的顯色液，為了減少陰陽性的誤判，需調(diào)整陰陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)以避免錯(cuò)判。