豬瘟病毒熒光定量檢測(cè)試劑盒——探針?lè)?用于定性檢測(cè)豬血液、唾液、鼻腔分泌物、糞便等樣本中的豬病病毒，該豬病以發(fā)熱、皮膚發(fā)紺、淋巴結(jié)，腎，胃腸粘膜明顯出血為特征，病情短，死亡率高。
本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)技術(shù)，以豬病病毒基因組中的高度保守序列為靶區(qū)域，設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan熒光探針，通過(guò)PCR擴(kuò)增實(shí)現(xiàn)對(duì)豬病病毒核酸的快速檢測(cè)。
【主要組成成分】
1. 試劑盒包裝組成
序號(hào) | 組成 | 規(guī)格 | 用量/個(gè)反應(yīng) |
1 | 2XAvantFast Probe mix | 1支，625μl/支 | 12.5μL |
2 | 引物探針 | 1支，375μl/支 | 7.5μl |
3 | 陽(yáng)性對(duì)照 | 1支，250μl/支 |
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4 | 陰性對(duì)照 | 1支，250μl/支 |
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【檢驗(yàn)方法】
一、 使用前準(zhǔn)備：
1. 試劑盒中各組分充分解凍并混勻。
2. 核酸提取尤其是針對(duì)RNA時(shí)采用冷凍高速離心機(jī)，操作前請(qǐng)將溫度設(shè)定在4℃預(yù)冷。
3. 推薦使用進(jìn)口離心管和帶濾芯移液器頭進(jìn)行操作，檢測(cè)過(guò)程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套。
二、 核酸提?。ㄔ跇颖咎幚韰^(qū)進(jìn)行）：
1. 按照試劑說(shuō)明書(shū)操作
三、 PCR擴(kuò)增檢測(cè)：
1. 配液（在試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）：取出擴(kuò)增反應(yīng)液，室溫融化后充分混勻，短暫離心，并按反應(yīng)個(gè)數(shù)分別取反應(yīng)液和酶按照以下配比配制反應(yīng)液：（注意應(yīng)考慮有陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照甚至空白對(duì)照）
試劑 | 2XAvantFast Probe mix | 引物探針 |
用量（反應(yīng)個(gè)數(shù)為ｎ） | 12.5μl×ｎ | 7.5μl×ｎ |
反應(yīng)液配制時(shí)應(yīng)充分混勻，短暫離心，按20μl/管分裝到PCR反應(yīng)管中，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)；
2. 加樣（在樣本處理區(qū)進(jìn)行）：分別加入5μl步驟二中處理好的樣本、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照，蓋好管蓋，轉(zhuǎn)移至核酸擴(kuò)增區(qū)；
3. PCR擴(kuò)增檢測(cè)（在核酸擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行）：
將反應(yīng)管置于全自動(dòng)熒光定量PCR儀樣品槽中，熒光通道選Hex，設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng)條件為：
階段 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)次數(shù) |
預(yù)變性
| 95℃ | 2min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 10s | 40
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| 退火和延伸 | 60℃ | 30s |
*如果使用ABI系列熒光PCR儀，設(shè)置擴(kuò)增體積為25μl，同時(shí)要選擇passive reference和quencher為none的模式。
關(guān)鍵字： 豬病;熒光定量;PCR;豬瘟檢測(cè);qPCR;
廣州阿凡提生物技術(shù)有限公司是一家專注于動(dòng)物疫病診斷的高科技企業(yè)。以基因檢測(cè)技術(shù)為核心，專注于檢測(cè)設(shè)備及配套試劑的研發(fā)、生產(chǎn)及銷售，致力于為畜牧養(yǎng)殖業(yè)提供便捷、可靠、優(yōu)良的畜禽疫病診斷與防疫檢測(cè)設(shè)備和試劑。公司產(chǎn)品目前覆蓋納米磁珠法核酸提取儀、全自動(dòng)酶標(biāo)儀、大型自動(dòng)化核酸工作站，配套試劑品種達(dá)數(shù)百種，主要針對(duì)豬瘟、豬藍(lán)耳、豬偽狂、新城疫、口蹄疫等近百種獸醫(yī)診斷制品，廣泛應(yīng)用于全國(guó)各級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、海關(guān)、養(yǎng)殖企業(yè)、食品加工企業(yè)、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、大專院校、科研院所等。阿凡提生物以其"專業(yè)而富有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)能力""持續(xù)專注的研究開(kāi)發(fā)"和"實(shí)現(xiàn)高品質(zhì)產(chǎn)品的生產(chǎn)能力"為我們的客戶提供始終如一的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)。