碧云天生產(chǎn)的Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(高靈敏度儀器用) (Myco-Lumi? Luminescent Mycoplasma Detection Kit for High Sensitivity Instrument)，簡稱Myco-Lumi?或MycoLumi?，是一種通過化學(xué)發(fā)光法檢測培養(yǎng)的細(xì)胞等生物材料中是否有支原體污染的試劑盒。
Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(高靈敏度儀器用) (C0298)的用途與碧云天的同類產(chǎn)品Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)相同，性能略有不同，具體請參考下表。兩種產(chǎn)品根據(jù)使用儀器的靈敏度對Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒進(jìn)行了一定的改良，使檢測試劑盒更適合相應(yīng)的檢測儀器。在相同檢測儀器條件下，Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)的讀值更高，一般為Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(高靈敏度儀器用) (C0298)的10-50倍，所以Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)更適合于低靈敏度、相對低讀值的化學(xué)發(fā)光儀，例如Molecular Devices的SpectraMax? M3等儀器，該類儀器的讀值較低，使用低靈敏度儀器專用的檢測試劑盒可確保檢測時可獲得良好的化學(xué)發(fā)光讀數(shù)。Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)也可用于高靈敏度的儀器，此時讀值比較高，但對支原體的檢測靈敏度略差一些，即陽性樣品的比值會低一些。而Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(高靈敏度儀器用) (C0298)更適合于高靈敏度、相對高讀值的化學(xué)發(fā)光儀，例如ThermoFisher的多功能酶標(biāo)儀Varioskan Flash/Varioskan LUX等儀器，該類儀器的讀值較高，使用高靈敏度儀器專用的檢測試劑盒可使對于支原體的檢測靈敏度更高。Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(高靈敏度儀器用) (C0298)與Lonza公司的MycoAlert? Mycoplasma Detection Kit相似，而Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)與Lonza公司的MycoAlert? PLUS Mycoplasma Detection Kit相似。Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)對支原體的檢測靈敏度略低于Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(高靈敏度儀器用) (C0298)，具體表現(xiàn)為陽性樣品的比值會低一些，但仍可滿足常規(guī)的檢測需求。兩種試劑盒的比較和選擇請參考下表：
| 產(chǎn)品編號 | C0297 | C0298 |
| 產(chǎn)品名稱 | Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(低靈敏度儀器用) | Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒(高靈敏度儀器用) |
| 適用儀器 | 低靈敏度、低讀值的化學(xué)發(fā)光儀 | 高靈敏度、高讀值的化學(xué)發(fā)光儀 |
| 代表性儀器 | SpectraMax? M3 (Molecular Devices) | Varioskan Flash/Varioskan LUX (ThermoFisher) |
| 試劑信號強度(相同儀器條件下) | 相對較高 | 相對較低 |
| 檢測靈敏度 | ★★★★ | ★★★★★ |
| 產(chǎn)品穩(wěn)定性 | 非常穩(wěn)定 | 非常穩(wěn)定 |
| 同類產(chǎn)品 | MycoAlert? PLUS Mycoplasma Detection Kit(Lonza) | MycoAlert? Mycoplasma Detection Kit(Lonza) |
支原體(Mycoplasma)是最小、 的原核生物。支原體有如下特征：支原體無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，所以針對細(xì)胞壁的許多常見的抗生素，如青霉素或β-內(nèi)酰胺類抗生素對支原體無效；支原體大小介于細(xì)菌和病毒之間，約為0.2-0.8μm，所以部分支原體可通過0.22μm濾器，常規(guī)的過濾對支原體無效；很多支原體由于自身的生物合成能力有限而依靠宿主提供營養(yǎng)，所以通常吸附或散落在細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。支原體的這些特征使細(xì)胞培養(yǎng)過程中存在支原體污染的風(fēng)險，細(xì)胞的支原體污染已經(jīng)成為一個 性的普遍問題。支原體污染可能會嚴(yán)重影響細(xì)胞的狀態(tài)，使細(xì)胞的基因表達(dá)、代謝特征發(fā)生變化，導(dǎo)致細(xì)胞生長減緩、分化和死亡異常，嚴(yán)重影響細(xì)胞功能。這些影響因素會嚴(yán)重影響實驗結(jié)果的可靠性、可重復(fù)性和一致性，因此支原體污染的檢測非常重要。
細(xì)胞培養(yǎng)過程中的細(xì)菌、酵母或霉菌污染在光學(xué)顯微鏡下可見，但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下通常不可見，必須通過特定的檢測方法進(jìn)行檢測。檢測支原體污染的常用方法有支原體分離培養(yǎng)、ELISA、特殊的生化檢測、PCR檢測以及DNA熒光染色檢測等。上述檢測方法中，大多操作步驟相對比較煩瑣、靈敏性不高或所需時間較長。
Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒是利用支原體特有酶的活性并通過ATP依賴的螢光素酶催化的發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行檢測，通過比較檢測試劑加入前后ATP量的變化來確定樣品是否有支原體污染。整個檢測過程只有兩個步驟，僅需約15分鐘。 步是在樣品中加入支原體檢測試劑A，5分鐘后進(jìn)行檢測，讀值為A，此時檢測的是樣品中原有ATP的量； 步是加入支原體檢測試劑B，10分鐘后進(jìn)行檢測，讀值為B，此時如果樣品有支原體污染，其特有的酶可以將支原體檢測試劑B中的ADP轉(zhuǎn)換為ATP，此時檢測的就是原有的本底ATP量和由支原體特有酶催化新生成的ATP量的總和。通過計算讀值B與A的比值就可以判斷是否有支原體污染。如果比值大于1.2表示有支原體污染，比值越大說明污染程度越高，如果比值小于0.9說明沒有支原體污染，如果比值介于0.9和1.2之間，建議原細(xì)胞(包含原培養(yǎng)液)繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時之后再測試一次。本試劑盒檢測支原體的原理參考圖1。
圖1. Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測試劑盒檢測支原體的原理。細(xì)胞上清中如果含有支原體，加入支原體檢測試劑A后會裂解支原體，支原體中的內(nèi)容物釋放，釋放出的ATP以及細(xì)胞上清中的ATP會在螢光素酶催化下產(chǎn)生螢光信號；加入支原體檢測試劑B之后，支原體中特有的酶可以使ADP轉(zhuǎn)換成ATP，生成的ATP可以跟檢測試劑中的螢光素酶反應(yīng)，產(chǎn)生的螢光信號進(jìn)一步增加。
本試劑盒可快速、有效、高靈敏度地檢測支原體污染，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中可隨時取少量培養(yǎng)液上清監(jiān)測是否有支原體污染。
本試劑盒螢光信號穩(wěn)定性好，在加入支原體檢測試劑A后，螢光信號穩(wěn)定，在5分鐘時即可檢測；加入支原體檢測試劑B后，如果是無支原體污染樣品，原有螢光信號會有一定程度的下降，而如果是有支原體污染樣品，螢光信號會隨時間延長而增強，10分鐘時即可檢測。
如果發(fā)現(xiàn)有支原體污染，建議更換無污染的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。如果有必要預(yù)防或去除支原體，可以使用專用的支原體預(yù)防或去除試劑(C0288、C0290、C0292、C0293)。
本試劑盒包含一定量陽性對照，檢測更可靠、便捷。陽性對照不含支原體，無支原體污染風(fēng)險。建議每次檢測都設(shè)置陽性對照。陽性對照也可單獨訂購(C0299 Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測陽性對照)。
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