G-418 遺傳霉素
貨號: ABT334-B
規(guī)格: 100mg/1g/5g
英文名稱: G418 sulfate
別名: G-418硫酸鹽；抗菌素G-418；抗生素G-418；
CAS: 108321-42-2
分子式: C20H40N4O10·2H2SO4
分子量: 692.71
純度: ≥95%
含量: ≥730u/mg
外觀: 白色粉末
溶解性: 1 mg/mL in water
保存條件: 2-8℃，有效期3年。
產(chǎn)品說明:
本產(chǎn)品僅用于科研，不可用于其他。
Geneticin (G418 Sulfate)是一種氨基糖苷類抗生素，與 gentamicin B1 的結(jié)構(gòu)相似，是80 S ribosomes 延伸的抑制劑，在原核和真核細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成過程中，能夠阻止蛋白質(zhì)的延伸階段，從而抑制蛋白質(zhì)的合成。
使用方法：（僅供參考）
1、常用篩選濃度
一般來說，剛開始篩選轉(zhuǎn)化子需要高濃度的 G418，并用一個較低濃度的 G418 用于維持培養(yǎng)。生長條件，細(xì)胞類型和其他的環(huán)境因素都可能影響 G418 的用量，因此次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定篩選濃度。通常情況，哺乳動物細(xì)胞篩選范圍 200-2000μg/mL；植物細(xì)胞：10-100μg/mL；酵母細(xì)胞：500-1000μg/mL；以下是一些細(xì)胞類型使用 G418 篩選使用的濃度，可做參考：
細(xì)胞類型 | 激活濃度 | 應(yīng)用 |
網(wǎng)柄菌屬 | a) 10μg/mL b) 30μg/mL | a）培養(yǎng)在培養(yǎng)液中 b）培養(yǎng)在凍干細(xì)菌上 |
哺乳動物 | a) 400 -1000μg/mL b) 200μg/mL | a）用于篩選 b）用于維持生長 |
植物 | a) 25-50μg/mL b) 10μg/mL | a）用于篩選 b）用于維持生長 |
酵母 | a) 500μg/mL b) 125-200μg/mL | a）用于篩選 b）用于維持生長 |
細(xì)菌 | 8-16μg/mL | 用于篩選 |
3. 殺滅曲線的建立
【注】：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素最低濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇 6 個濃度。處理分裂期的細(xì)胞時 G418 的活性最強(qiáng)，因此在添加 G418 之前需要讓細(xì)胞培養(yǎng)一段時間。
1) 天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照 20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2 培養(yǎng)過夜。
【注】：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例，可設(shè)定 0，50，100，200，400， 800，1000 μg/mL。
3) 第二天：去除舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每 3-4 天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期（如每 2 天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天 數(shù)（通常是 7-10 天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的最低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
4. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染 48 h 后，用含有適當(dāng)濃度的 G418 篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
【注】：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低。為了得到 較好的篩選效果，將細(xì)胞稀釋至豐度不超過 25%。
2) 每隔 3-4 天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選 7 天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這 取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移 5-10 個抗性克隆于 35 mm 細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng) 7 天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
注意事項(xiàng):
1. 本品不可高壓滅菌。
2. G418 不要和其他的抗生素/抗真菌劑（如青霉素/鏈霉素）共同使用，因?yàn)樗鼈兪?G418 的競爭性抑制劑。其他的抗生素也會產(chǎn)生交叉活性。
3. G418 加入培養(yǎng)體系中未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞有可能不會被殺死，原因在于藥物濃度過低，或者細(xì)胞密度過高。另外，快速分裂的細(xì)胞相對于緩慢增殖細(xì)胞，更容易被殺死。對照細(xì)胞（未轉(zhuǎn)染）可能抗生素添加 5-7 天后才能殺死，轉(zhuǎn)染細(xì)胞（抗性克隆子）的克隆需要 10-14 天形成。
4. 即使加入殺死劑量的 G418，細(xì)胞可能會繼續(xù)分裂 2-3 次。G418 的藥效通常在 2 天后才變得明顯。
5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： G-418;遺傳霉素;G-418硫酸鹽;抗生素G-418;抗菌素G-418;
金克隆生物公司位于北京經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)，主要從事生物醫(yī)藥試劑的研發(fā)和生產(chǎn)，并兼營部分生化試劑和儀器耗材，主營方向有細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、蛋白與免疫、組織學(xué)、微生物培養(yǎng)等相關(guān)試劑與耗材。庫存現(xiàn)貨10000多種，其中我公司自主開發(fā)的分子生物學(xué)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測試劑、分子免疫學(xué)產(chǎn)品等在質(zhì)量和價格方面具有較大的市場優(yōu)勢，歡迎廣大經(jīng)銷商洽談合作。