用途
該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清，血漿或其他生物體液中天然及部分重組CFD濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人CFD抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的人CFD會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人CFD抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗人CFD抗體與結(jié)合在包被抗體上的人CFD結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，CFD濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中CFD的濃度。
| 反應(yīng)類型 | 夾心法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應(yīng)時間 | 3.5h |
| 反應(yīng)性 | Human |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 1.56—100 ng/mL |
| 靈敏度 | 0.94 ng/mL |
| 樣本體積 | 100μL |
| 樣本類型 | 血清，血漿或其他生物體液 |
特異性
可檢測樣本中的人CFD，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實驗操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標準曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗建立標準曲線。
| (ng/mL) | O.D | Average | Corrected |
|---|
| 100 | 2.575
2.513 | 2.544 | 2.484 |
| 50 | 1.634
1.62 | 1.627 | 1.567 |
| 25 | 0.996
0.929 | 0.963 | 0.903 |
| 12.5 | 0.465
0.47 | 0.468 | 0.408 |
| 6.25 | 0.265
0.268 | 0.267 | 0.207 |
| 3.13 | 0.185
0.18 | 0.183 | 0.123 |
| 1.56 | 0.119
0.124 | 0.122 | 0.062 |
| 0 | 0.057
0.062 | 0.06 | -- |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(ng/mL) | 4.66 | 11.33 | 46.40 | 4.89 | 12.36 | 41.26 |
Standard
deviation | 0.28 | 0.57 | 1.92 | 0.24 | 0.60 | 2.12 |
| C V (%) | 6.01 | 5.03 | 4.14 | 4.91 | 4.85 | 5.14 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 92-106 | 100 |
| EDTA plasma (n=8) | 97-106 | 102 |
| Cell culture media (n=8) | 93-100 | 96 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 97-108 | 94-104 | 92-105 |
| Average (%) | 102 | 99 | 99 |
| 1:4 | Range (%) | 92-102 | 94-105 | 86-96 |
| Average (%) | 98 | 101 | 93 |
| 1:8 | Range (%) | 95-109 | 91-107 | 96-103 |
| Average (%) | 102 | 99 | 99 |
| 1:16 | Range (%) | 100-109 | 90-103 | 93-103 |
| Average (%) | 103 | 96 | 97 |
注意事項：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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關(guān)鍵字： 人補體因子D(CFD)Elisa試劑盒;人補體因子D(CFD);人補體因子D;
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