用途
該試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中天然VIP濃度。
檢測原理
本試劑盒采用競爭ELISA法。用人VIP抗原包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人VIP與包被的人VIP競爭生物素標(biāo)記的抗人VIP單抗上的結(jié)合位點(diǎn)，游離的成分被洗去。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，人VIP濃度與OD450值之間呈反比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中人VIP的濃度。
| 反應(yīng)類型 | 競爭法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應(yīng)時間 | 2.0h |
| 反應(yīng)性 | 人 |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 7.81-500 pg/mL |
| 靈敏度 | 4.69 pg/mL |
| 樣本體積 | 50μL |
| 樣本類型 | 血清、血漿或其他相關(guān)生物液體 |
特異性
可檢測樣本中的人VIP，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| (pg/mL) | O.D | Average |
|---|
| 500 | 0.316
0.36 | 0.338 |
| 250 | 0.434
0.464 | 0.449 |
| 125 | 0.663
0.633 | 0.648 |
| 62.5 | 0.95
0.982 | 0.966 |
| 31.25 | 1.401
1.375 | 1.388 |
| 15.63 | 1.844
1.816 | 1.83 |
| 7.81 | 2.187
2.193 | 2.19 |
| 0 | 2.71
2.714 | 2.712 |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| | Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(pg/mL) | 23.50 | 74.30 | 194.50 | 22.70 | 75.30 | 202.10 |
Standard
deviation | 1.50 | 3.60 | 6.80 | 1.20 | 3.80 | 9.70 |
| C V (%) | 6.38 | 4.85 | 3.50 | 5.29 | 5.05 | 4.80 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 92-104 | 98 |
| EDTA plasma (n=8) | 90-103 | 97 |
| Cell culture media (n=8) | 86-102 | 93 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。
| | | Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 89-100 | 93-107 | 92-107 |
| Average (%) | 94 | 98 | 99 |
| 1:4 | Range (%) | 83-97 | 92-104 | 99-114 |
| Average (%) | 90 | 97 | 104 |
| 1:8 | Range (%) | 87-100 | 93-105 | 97-112 |
| Average (%) | 94 | 98 | 103 |
| 1:16 | Range (%) | 83-96 | 86-102 | 95-111 |
| Average (%) | 90 | 93 | 102 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計(jì)算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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