用途
該試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中天然PGF2α濃度。
檢測原理
本試劑盒采用競爭ELISA法。用人PGF2α抗原包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的人PGF2α與包被的人PGF2α競爭生物素標記的抗人PGF2α單抗上的結(jié)合位點，游離的成分被洗去。加入辣根過氧化物酶標記的親和素，生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，人PGF2α濃度與OD450值之間呈反比，通過繪制標準曲線計算出樣品中人PGF2α的濃度。
| 反應類型 | 競爭法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應時間 | 2.0h |
| 反應性 | 人 |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 7.81-500 pg/mL |
| 靈敏度 | 4.69 pg/mL |
| 樣本體積 | 50μL |
| 樣本類型 | 血清、血漿或其他相關(guān)生物液體 |
特異性
可檢測樣本中的人PGF2α，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應。
重復性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實驗操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標準曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗建立標準曲線。
| (pg/mL) | O.D | Average |
|---|
| 500 | 0.336
0.388 | 0.362 |
| 250 | 0.452
0.498 | 0.475 |
| 125 | 0.687
0.66 | 0.674 |
| 62.5 | 0.969
0.991 | 0.98 |
| 31.25 | 1.382
1.354 | 1.368 |
| 15.63 | 1.758
1.748 | 1.753 |
| 7.81 | 2.055
2.057 | 2.056 |
| 0 | 2.471
2.487 | 2.479 |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| | Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(pg/mL) | 24.30 | 47.50 | 205.10 | 21.90 | 47.70 | 224.40 |
Standard
deviation | 1.30 | 2.80 | 10.90 | 1.50 | 2.50 | 7.40 |
| C V (%) | 5.35 | 5.89 | 5.31 | 6.85 | 5.24 | 3.30 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 94-111 | 102 |
| EDTA plasma (n=8) | 94-109 | 100 |
| Cell culture media (n=8) | 87-98 | 92 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。
| | | Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 100-115 | 93-111 | 84-96 |
| Average (%) | 106 | 101 | 90 |
| 1:4 | Range (%) | 90-105 | 93-106 | 98-115 |
| Average (%) | 96 | 99 | 105 |
| 1:8 | Range (%) | 87-102 | 86-102 | 100-114 |
| Average (%) | 94 | 93 | 107 |
| 1:16 | Range (%) | 84-94 | 93-109 | 96-112 |
| Average (%) | 89 | 100 | 102 |
注意事項：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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關(guān)鍵字： 人前列腺素F2α(PGF2α);人前列腺素F2α;人前列腺素F2α elisa試劑盒;
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