用途
該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清，血漿或其他生物體液中天然及部分重組CD4濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人CD4抗體包被于酶標(biāo)板上，實驗時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人CD4會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人CD4抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素?？谷薈D4抗體與結(jié)合在包被抗體上的人CD4結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，CD4濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中CD4的濃度。
| 反應(yīng)類型 | 夾心法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應(yīng)時間 | 3.5h |
| 反應(yīng)性 | Human |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 0.31—20 ng/mL |
| 靈敏度 | 0.19 ng/mL |
| 樣本體積 | 100μL |
| 樣本類型 | 血清，血漿或其他生物體液 |
特異性
可檢測樣本中的人CD4，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實驗操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| (ng/mL) | O.D | Average | Corrected |
|---|
| 20 | 2.514
2.524 | 2.519 | 2.459 |
| 10 | 1.618
1.676 | 1.647 | 1.587 |
| 5 | 0.975
0.955 | 0.965 | 0.905 |
| 2.5 | 0.455
0.469 | 0.462 | 0.402 |
| 1.25 | 0.251
0.249 | 0.25 | 0.19 |
| 0.63 | 0.173
0.159 | 0.166 | 0.106 |
| 0.31 | 0.113
0.113 | 0.113 | 0.053 |
| 0 | 0.053
0.067 | 0.06 | -- |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(ng/mL) | 0.99 | 1.69 | 9.32 | 0.94 | 1.81 | 8.91 |
Standard
deviation | 0.06 | 0.08 | 0.31 | 0.05 | 0.09 | 0.37 |
| C V (%) | 6.06 | 4.73 | 3.33 | 5.32 | 4.97 | 4.15 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 93-108 | 100 |
| EDTA plasma (n=8) | 90-107 | 97 |
| Cell culture media (n=8) | 91-105 | 97 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 94-110 | 86-99 | 88-102 |
| Average (%) | 102 | 91 | 95 |
| 1:4 | Range (%) | 90-103 | 88-98 | 85-101 |
| Average (%) | 96 | 93 | 92 |
| 1:8 | Range (%) | 89-101 | 86-96 | 88-101 |
| Average (%) | 95 | 91 | 93 |
| 1:16 | Range (%) | 93-110 | 83-95 | 87-102 |
| Average (%) | 100 | 90 | 93 |
注意事項：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
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關(guān)鍵字： 人白細(xì)胞分化抗原CD4(CD4);人白細(xì)胞分化抗原CD4 Elisa試劑盒;Human CD4 elisa kit;
湖北艾普蒂生物工程有限公司（簡稱：艾普蒂）由在國內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗的專業(yè)技術(shù)團隊和企業(yè)管理團隊組建而成，專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
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