試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。 
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 
10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】：

中文名稱(chēng)：eNOS Elisa Kit
       英文名稱(chēng)：Rabbit Endothelial nitric oxide synthase, eNOS Elisa Kit
       包裝規(guī)格：液體盒裝 96T/48T
　　保存條件：2-8℃（長(zhǎng)期不使用時(shí)，部分試劑應(yīng)放在-20℃條件下）。
　　有效期：6個(gè)月
　　存儲(chǔ)運(yùn)輸：低溫避光，請(qǐng)勿重壓，輕拿輕放（現(xiàn)貨供應(yīng)，一般為快遞運(yùn)輸，江浙滬隔天到，外地及偏遠(yuǎn)地方三 至五天時(shí)間到貨。）
　　Elisa試劑盒可測(cè)種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚(yú)等。
　　Elisa試劑盒適用范圍：此試劑盒僅用于科研實(shí)驗(yàn)，禁用于臨床。

試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào)，只要客戶(hù)提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿(mǎn)足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類(lèi)風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測(cè)抗原時(shí)，可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解
HCT-8(人盲腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0402NCI-H520(人肺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 恒河猴腎細(xì)胞;MMK3錄化1公斤

人導(dǎo)管瘤細(xì)胞;BT-474姆沙伯W/AW-DMCS CHROMOSORB W/cW-DMCS

PDPN Others Mouse 小鼠 Podoplanin / PDPN 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鄰苯 o-Phenylenediamine (≥98%, OPD)  10G 通用試劑

CM-R022大鼠甲狀腺上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL錄化三本四氮唑沙保羅培養(yǎng)基25毫升2～8℃

Raw264.7, 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 牛腎細(xì)胞,MDBK細(xì)胞 Hs 578Bst(人成纖維細(xì)胞)(D-基半乳糖)
TWSG1 Others Mouse 小鼠 TWSG1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) MEGA-10MEGA-10超級(jí)5G85261-20-7COLD

大鼠腦膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL2-安基-4-羧醋 2-cminoisonicotinic ccid 1336-8-

MCF 10A人正常上皮細(xì)胞 MCF 10A of normal human mammary epithelial cells MEGM Bullet Kit(Clonetics Corparation CC-3150)+100ng/ml choleratoxin(Sigma C8052)2XYTMEDIUMBROTH2XYT 培養(yǎng)基肉湯生物技術(shù)級(jí)100GRT

IFNA4 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA4 / Ierferon alpha-4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)芐青霉素鈉1公斤

MPC-11(小鼠漿細(xì)胞瘤) 5×106cells/瓶×2 BALB/3T3(BALB/C小鼠胚成纖維細(xì)胞)2183-17-71-1酸鈉鹽ALPHA-NAPHTHYL PHOSPHATE DIwo7ium SALT
eNOS Elisa KitPANC-1人癌細(xì)胞 Human pancreatic cancer cell line PANC-1 DMEM+10% FBS漢黃芩素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Wogonin

壞死因子蒿本內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Ligustilide

人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 (HAEC)( 5×105 ) BRL 3A, 大鼠肝正常細(xì)胞 Rattus和厚樸酚(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Honokiol

小鼠瘤細(xì)胞;EL4和厚樸酚（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Honokiol

TFRC Others Mouse 小鼠 TFRC / CD71 / ansferrin Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 癸氟奮乃靜（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定Fluphenazine Decanoate

注意事項(xiàng)：
1加樣：
①實(shí)驗(yàn)樣本過(guò)多時(shí)，可分批次操作，以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗(yàn)時(shí)，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性，此外，要做到一份樣本一個(gè)移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件；
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測(cè)量觀察；
③96孔板周?chē)着c中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板：
①手工洗板時(shí)，拍板時(shí)要垂直，避免交叉污染，用力不能過(guò)猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測(cè)定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測(cè)定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下，需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測(cè)試。