參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:洋蔥伯克氏菌PCR檢測試劑盒
型號 : EY00P240
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
運輸:低溫
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
實驗操作過程:
一、 CHO DNA 定量參考品的稀釋及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer 將 CHO control DNA 進行梯度稀釋, 稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具體操作如下:
1.將試劑盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
輕微振蕩混勻,簡短快速離心。
2.取 6 支干凈的 1.5ml 離心管,分別標(biāo)記為 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中, 然后渦旋振蕩混勻 5- 10s 后短時快速離心 5s,渦旋振蕩和快速離心各重復(fù) 3 次。
5,按表 2 依次進行 6 次梯度稀釋操作,稀釋操作同步驟 4。
表 2. CHO control DNA 的稀釋
稀釋管 | 稀釋體積 | 濃度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加樣回收質(zhì)控 ERC 的制備
根據(jù)待測樣本的殘留量設(shè)置 ERC 中 CHO control DNA 的加樣濃度 (以制備加 45pg CHO control DNA 的樣本 ERC 為例),操作如下:
1,取待測樣本 100u,加至 1.5ml 干凈的離心管中;
2,加入 1.5ul SD2,混勻,標(biāo)記為樣本 ERC。
注:樣本 ERC 和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。
三、陰性質(zhì)控 NEG 的制備
根據(jù)實驗設(shè)置陰性質(zhì)控,操作如下:
1,取 100ul 樣本基質(zhì)溶液(或洗脫液)加至 1.5ml 干凈的離心管中標(biāo)記為陰性質(zhì)控 NEG。 注:陰性質(zhì)控 NEG 樣本和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。
四、 qPCR 反應(yīng)液的制備和加樣
1,根據(jù)所要檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線及待測樣本數(shù)量,計算所需反應(yīng)孔數(shù),一般做 3 個重復(fù)孔/樣。
反應(yīng)孔數(shù)= (6 個濃度梯度+1 個無模板對照 NTC+1 個陰性質(zhì)控 NEG+待測樣本×2) ×3 注:待測樣本×2 是為了讓每個待測樣本檢測時都同時做樣本 ERC 。 2,根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計算本次實驗所需的各組分的所需總量以制備 pre-mix:
2×Taqman master mix=(反應(yīng)孔數(shù)+2) ×15ul (含有 2 孔的損失量)
10×CHO qPCR mix= (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×2ul
3,各試劑置于冰上融化,振蕩混勻,按表 3 所示進行加樣:
表 3.各反應(yīng)孔加樣示例
標(biāo)準(zhǔn)曲線 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待測樣本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待測樣本 |
ERC 樣本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 樣本 |
注意事項
1.整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標(biāo)記。
7.儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
小香豬皮膚細胞;SSC-S2 組織細胞瘤細胞,U-937細胞 NUTU-19細胞,大鼠卵巢癌細胞株2-溴-4'-苯基乙酰苯(>98.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)2-Bromo-4'-phenylacetophenone
SV40轉(zhuǎn)染成骨細胞;hFOB 1.19丹磺酰氯(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)Dabsyl Chloride
HA Others H1N3 甲型流感 H1N3 (A/duck/NZL/160/1976) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細胞裂解液 (陽性對照) O-4-硝基芐基羥胺鹽酸鹽(>99.0%(HPLC),用于高效液相色譜標(biāo)記)質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(HPLC),用于高效液相色譜標(biāo)記O-4-Nitrobenzylhydroxylamine
CL-0152MDA-MB-453(癌細胞)5×106cells/瓶×27-乙酰氧基-4-溴甲基(>98.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo)記7-Acetoxy-4-bromomethylcoumarin
F10 Others Human Coagulation Factor X / FX / F10 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 1-萘乙醇(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR1-Naphthalene ethanol
洋蔥伯克氏菌PCR檢測試劑盒黃體生成激素釋放激素(4-10)質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRLHRH (4-10) 英文名稱MouseCCL1ELISAkit小鼠CCL1規(guī)格:96T/48T 大鼠細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
細胞激活五肽質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRLymphocyte Activating Pentapeptide 冰凍切片組織細胞色素C氧化酶表達組織化學(xué)檢測試劑盒10/20 人胃蛋白酶原A(PG-A)試劑盒 human Pepsinogen A,PG-A ELISA Kit
蜂質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRMelittin(Mellitin) RatEsadiol,E2ELISA試劑盒大鼠雌二醇(E2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 中性蛋白酶測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
Metamorphosin A質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRMetamorphosin A 小鼠CD30配體(CD30L)ELISA試劑盒 ,英文名: CD30L ELISA Kit RatPlatelet-DerivedGrowthFactorSolubleReceptorα,PDGFsR-αELISA試劑盒大鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
十一酸甲酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Methyl undecanoate質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA檢測試劑盒MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISAKIT 96T/48T ELISAKitu-T4小鼠高敏甲狀腺素規(guī)格:48T/96T
甲基橙(生物染色)Methyl orange質(zhì)量規(guī)格:BS 人弓蛔蟲(Tc)抗體(IgG)試劑盒 Human Tc IgG ELISA kit Humanacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit人乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
分散橙13Disperse Orange 13質(zhì)量規(guī)格:90%,進口分包 RatGonadoopin-releasinghormonereceptor,GHRELISAKit大鼠促性腺激素釋放激素受體(GHR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
酸性橙74 Orange 74質(zhì)量規(guī)格:>85% ATP生物發(fā)光法細胞繁殖與毒性定量檢測試劑盒50 小鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CF)試劑盒 Mouse Ciliary Neuroophic Factor,CF ELISA Kit
關(guān)鍵字: 洋蔥伯克氏菌核酸檢測試劑盒;洋蔥伯克氏菌PCR試劑盒;洋蔥伯克氏菌PCR擴增試劑盒;洋蔥伯克氏菌PCR熒光探針試劑盒;洋蔥伯克氏菌通用型PCR試劑盒;
上海一研生物科技有限公司Shanghai yiyan bio-technology Co. Ltd.主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑等為一體的科研產(chǎn)品銷售企業(yè),公司自成立以來,秉承""全心全意服務(wù)于科研工作者""的企業(yè)理念,立足生物科技領(lǐng)域,運用生物技術(shù)和科研試劑,發(fā)展現(xiàn)代生物科技,為各類大中小醫(yī)院及其它醫(yī)療機構(gòu)、高等院校、科研院所、企事業(yè)單位提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品,服務(wù)生物科技領(lǐng)域的科學(xué)研究人員。
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