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腸出血性大腸桿菌PCR檢測試劑盒
  • 腸出血性大腸桿菌PCR檢測試劑盒

腸出血性大腸桿菌PCR檢測試劑盒

價格 3380
包裝 50T
最小起訂量 1T
發(fā)貨地 上海
更新日期 2024-12-23
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產品詳情

中文名稱:腸出血性大腸桿菌PCR檢測試劑盒品牌: 一研
產地: 國產保存條件: -20℃
產品類別: PCR試劑盒 PCR檢測試劑盒
型號: EY00P435
2024-12-23 腸出血性大腸桿菌PCR檢測試劑盒 50T/3380RMB 3380 一研 國產 -20℃ PCR試劑盒 PCR檢測試劑盒

參數(shù)規(guī)格:
產品名稱:腸出血性大腸桿菌PCR檢測試劑盒
型號 :   EY00P435
產品規(guī)格:50T
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20保存
產品有效期:一年
運輸:低溫
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5PCR 反應液的配制;6PCR技術的基本原理;7PCR的反應動力學;8PCR擴增產物;9PCR反應體系與反應條件。
實驗操作過程:
一、 CHO DNA 定量參考品的稀釋及標準曲線的制備
用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer CHO control DNA 進行梯度稀釋, 稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 3pg/ul 、300fg/ul 30fg/ul 、3fg/ul 。具體操作如下:
1.
將試劑盒中的 CHO control DNA DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
輕微振蕩混勻,簡短快速離心。
2.
6 支干凈的 1.5ml 離心管,分別標記為 SD1 ,SD2 SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3
,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。
4,
2ul  CHO  control  DNA 加入 SD1 管中,  然后渦旋振蕩混勻 5- 10s 后短時快速離心 5s,渦旋振蕩和快速離心各重復 3 次。
5,
按表 2 依次進行 6 次梯度稀釋操作,稀釋操作同步驟 4。
                                 
2. CHO control DNA 的稀釋

稀釋管

釋體積

濃度

SD1

2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer

300 pg/ul

SD2

20ul SD1+180ul DNA dilution buffer

30 pg/ul

SD3

20ul SD2+180ul DNA dilution buffer

3 pg/ul

SD4

20ul SD3+180ul DNA dilution buffer

300 fg/ul

SD5

20ul SD4+180ul DNA dilution buffer

30 fg/ul

SD6

20ul SD5+180ul DNA dilution buffer

3 fg/ul

二、加樣回收質控 ERC 的制備
根據(jù)待測樣本的殘留量設置 ERC CHO  control  DNA 的加樣濃度  (以制備加 45pg  CHO control DNA 的樣本 ERC 為例),操作如下:
1
,取待測樣本 100u,加至 1.5ml 干凈的離心管中;
2
,加入 1.5ul SD2,混勻,標記為樣本 ERC。
注:樣本 ERC 和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。
三、陰性質控 NEG 的制備

4.png

根據(jù)實驗設置陰性質控,操作如下:
1
,取 100ul 樣本基質溶液(或洗脫液)加至 1.5ml 干凈的離心管中標記為陰性質控 NEG。 注:陰性質控 NEG 樣本和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。
四、 qPCR 反應液的制備和加樣
1
,根據(jù)所要檢測的標準曲線及待測樣本數(shù)量,計算所需反應孔數(shù),一般做 3 個重復孔/樣。
反應孔數(shù)=  (6 個濃度梯度+1 個無模板對照 NTC+1 個陰性質控 NEG+待測樣本×2) ×3 注:待測樣本×2 是為了讓每個待測樣本檢測時都同時做樣本 ERC                   2,根據(jù)反應孔數(shù)計算本次實驗所需的各組分的所需總量以制備 pre-mix
2×Taqman master mix=(
反應孔數(shù)+2) ×15ul    (含有 2 孔的損失量)
10×CHO qPCR mix=  (
反應孔數(shù)+2) ×3ul
RNase-free H2O=  (
反應孔數(shù)+2) ×2ul
3
,各試劑置于冰上融化,振蕩混勻,按表 3 所示進行加樣:
                                 
3.各反應孔加樣示例

標準曲線

20ul pre-mix+   10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6

NTC

20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer

NEG

20ul pre-mix+ 10ul NEG

測樣本

20ul pre-mix+ 10ul  待測樣本

ERC 樣本

0ul pre-mix+ 10ul ERC 樣本

注意事項
1.整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2.
為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3.
每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4.
試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。
5.
試劑盒內所配陰性和陽性對照在次使用前應全部轉移至標本準備區(qū),并單獨存放。
6.
為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7.
儀器擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。
8.ABI
系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None
9.
實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
 
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公司簡介

上海一研生物科技有限公司Shanghai yiyan bio-technology Co. Ltd.主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑等為一體的科研產品銷售企業(yè),公司自成立以來,秉承""全心全意服務于科研工作者""的企業(yè)理念,立足生物科技領域,運用生物技術和科研試劑,發(fā)展現(xiàn)代生物科技,為各類大中小醫(yī)院及其它醫(yī)療機構、高等院校、科研院所、企事業(yè)單位提供優(yōu)質的產品,服務生物科技領域的科學研究人員。 公司具有對普通貨物、冷藏及冷凍倉庫的存儲、包裝及運輸能力。 公司將始終堅持信譽立業(yè)、以人為本、質量保證、誠信服務的宗旨,不斷拼搏,開拓進取,與各界朋友攜手共創(chuàng)美好未來。
成立日期 2014-06-05 (11年) 注冊資本 100
員工人數(shù) 50-100人 年營業(yè)額 ¥ 100萬以內
主營行業(yè) 生化試劑,抗體,細胞培養(yǎng),分子生物學,免疫安全 經(jīng)營模式 工廠,試劑
  • 上海一研生物科技有限公司
VIP 3年
  • 公司成立:11年
  • 注冊資本:100
  • 企業(yè)類型:營業(yè)執(zhí)照
  • 主營產品:、ELISA試劑盒、PCR檢測試劑盒、生化檢測試劑盒、標準品、抗體、細胞等
  • 公司地址:上海市閔行區(qū)莘福路2號樓
詢盤

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內容聲明:
以上所展示的信息由商家自行提供,內容的真實性、準確性和合法性由發(fā)布商家負責。 商家發(fā)布價格指該商品的參考價格,并非原價,該價格可能隨著市場變化,或是由于您購買數(shù)量不同或所選規(guī)格不同而發(fā)生變化。最終成交價格,請咨詢商家,以實際成交價格為準。請意識到互聯(lián)網(wǎng)交易中的風險是客觀存在的
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