參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱(chēng)：牛支原體PCR檢測(cè)試劑盒
型號(hào)　:　　 EY00P776
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程：
一、 CHO DNA 定量參考品的稀釋及標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備
用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer 將 CHO control DNA 進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)?/span> 稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具體操作如下：
1.將試劑盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，
輕微振蕩混勻，簡(jiǎn)短快速離心。
2.取 6 支干凈的 1.5ml 離心管，分別標(biāo)記為 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5, SD6。
3，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul  CHO  control  DNA 加入 SD1 管中，  然后渦旋振蕩混勻 5- 10s 后短時(shí)快速離心 5s，渦旋振蕩和快速離心各重復(fù) 3 次。
5,按表 2 依次進(jìn)行 6 次梯度稀釋操作，稀釋操作同步驟 4。
                                 表 2. CHO control DNA 的稀釋

二、加樣回收質(zhì)控 ERC 的制備
根據(jù)待測(cè)樣本的殘留量設(shè)置 ERC 中 CHO  control  DNA 的加樣濃度  (以制備加 45pg  CHO control DNA 的樣本 ERC 為例)，操作如下：
1，取待測(cè)樣本 100u，加至 1.5ml 干凈的離心管中；
2，加入 1.5ul SD2，混勻，標(biāo)記為樣本 ERC。
注：樣本 ERC 和同批待測(cè)樣本需一起進(jìn)行樣本前處理。
三、陰性質(zhì)控 NEG 的制備

根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性質(zhì)控，操作如下：
1，取 100ul 樣本基質(zhì)溶液(或洗脫液)加至 1.5ml 干凈的離心管中標(biāo)記為陰性質(zhì)控 NEG。 注：陰性質(zhì)控 NEG 樣本和同批待測(cè)樣本需一起進(jìn)行樣本前處理。
四、 qPCR 反應(yīng)液的制備和加樣
1，根據(jù)所要檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及待測(cè)樣本數(shù)量，計(jì)算所需反應(yīng)孔數(shù)，一般做 3 個(gè)重復(fù)孔/樣。
反應(yīng)孔數(shù)=  (6 個(gè)濃度梯度+1 個(gè)無(wú)模板對(duì)照 NTC+1 個(gè)陰性質(zhì)控 NEG+待測(cè)樣本×2) ×3 注：待測(cè)樣本×2 是為了讓每個(gè)待測(cè)樣本檢測(cè)時(shí)都同時(shí)做樣本 ERC 。                  2，根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)所需的各組分的所需總量以制備 pre-mix：
2×Taqman master mix=(反應(yīng)孔數(shù)+2) ×15ul    (含有 2 孔的損失量)
10×CHO qPCR mix=  (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×3ul
RNase-free H2O=  (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×2ul
3，各試劑置于冰上融化，振蕩混勻，按表 3 所示進(jìn)行加樣：
                                  表 3.各反應(yīng)孔加樣示例

注意事項(xiàng)
1.整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線(xiàn)殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
 P815小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞 P815 mouse mastocytoma cell DMEM培養(yǎng)基+10%FBS異丁司特(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Ibudilast

白細(xì)胞介素-10超家族吉西他濱質(zhì)量規(guī)格：>98%,free baseGemcitabine

SF767(腦瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SHG44(膠質(zhì)瘤細(xì)胞)沙利度胺（反應(yīng)停）質(zhì)量規(guī)格：>98%Thalidomide

CL-0052Caki-1(腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2沙利度胺(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Thalidomide

TNFRSF18 Others Human  GI / TNFRSF18 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 乙酰紫堇靈（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Acetylcorynoline

牛支原體PCR檢測(cè)試劑盒啶蟲(chóng)脒(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Acetamiprid  Rat calf iestine alkaline phosphatase (CIAP) ELISA Kit 大鼠牛小腸堿性1酸酶(CIAP)ELISA試劑盒  HumanDehydroepiandrosterone,DHEAELISA試劑盒人脫氫表雄同(DHEA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

赫斯特?zé)晒馊剂?/span>33258質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分bisBenzimide H 33258   HumanSerumamyloidA,SAAELISAKit 人血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  Humangrowthhormonerelasingfactor，GH-RFELISAKit人生長(zhǎng)激素釋放因子(GH-RF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

赫斯特?zé)晒馊剂?/span>33342質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分bisBenzimide H 33342 tri  Humanbasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISA試劑盒人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  雞可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Fluo-3 AM;鈣熒光探針質(zhì)量規(guī)格：>90%,進(jìn)口Fluo 3-AM   植物質(zhì)粒菌化試劑盒20  人吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)試劑盒 Human indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO ELISA Kit

木瓜蛋白酶(2000u/mg)Papain質(zhì)量規(guī)格：2000u/mg;200萬(wàn)u/g  RatInsulieceptorβ,ISR-βELISAKit大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  人抗IgA抗體(ai-IgA-Ab)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

胰酶(1:2500)Pancreatin質(zhì)量規(guī)格：酶活1:2500,BR  BrdU標(biāo)記法組織冰凍切片細(xì)胞繁殖熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20  小鼠環(huán)1酸鳥(niǎo)苷(cGMP)試劑盒 Mouse Cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit

癸酸甲酯(Standard for GC ,≥99.5%(GC))Methyl decanoate質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC ,≥99.5%(GC)  MouseLactateDehydrogenase,LDHELISA試劑盒小鼠乳酸脫氫酶(LDH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白7(IGFBP7/MAC25/PSF)ELISA試劑盒 ，英文名： IGFBP7/MAC25/PSF ELISA Kit

甲酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))Methyl laurate質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)  小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒 ，英文名： PEDF ELISA Kit  MouseAi-myocardialaibody,AMAELISA試劑盒小鼠抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T