參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:產(chǎn)紫青霉PCR檢測(cè)試劑盒
型號(hào) : EY00P885
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
運(yùn)輸:低溫
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
實(shí)驗(yàn)操作過程:
一、 CHO DNA 定量參考品的稀釋及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer 將 CHO control DNA 進(jìn)行梯度稀釋, 稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具體操作如下:
1.將試劑盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
輕微振蕩混勻,簡短快速離心。
2.取 6 支干凈的 1.5ml 離心管,分別標(biāo)記為 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中, 然后渦旋振蕩混勻 5- 10s 后短時(shí)快速離心 5s,渦旋振蕩和快速離心各重復(fù) 3 次。
5,按表 2 依次進(jìn)行 6 次梯度稀釋操作,稀釋操作同步驟 4。
表 2. CHO control DNA 的稀釋
稀釋管 | 稀釋體積 | 濃度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加樣回收質(zhì)控 ERC 的制備
根據(jù)待測(cè)樣本的殘留量設(shè)置 ERC 中 CHO control DNA 的加樣濃度 (以制備加 45pg CHO control DNA 的樣本 ERC 為例),操作如下:
1,取待測(cè)樣本 100u,加至 1.5ml 干凈的離心管中;
2,加入 1.5ul SD2,混勻,標(biāo)記為樣本 ERC。
注:樣本 ERC 和同批待測(cè)樣本需一起進(jìn)行樣本前處理。
三、陰性質(zhì)控 NEG 的制備
根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性質(zhì)控,操作如下:
1,取 100ul 樣本基質(zhì)溶液(或洗脫液)加至 1.5ml 干凈的離心管中標(biāo)記為陰性質(zhì)控 NEG。 注:陰性質(zhì)控 NEG 樣本和同批待測(cè)樣本需一起進(jìn)行樣本前處理。
四、 qPCR 反應(yīng)液的制備和加樣
1,根據(jù)所要檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線及待測(cè)樣本數(shù)量,計(jì)算所需反應(yīng)孔數(shù),一般做 3 個(gè)重復(fù)孔/樣。
反應(yīng)孔數(shù)= (6 個(gè)濃度梯度+1 個(gè)無模板對(duì)照 NTC+1 個(gè)陰性質(zhì)控 NEG+待測(cè)樣本×2) ×3 注:待測(cè)樣本×2 是為了讓每個(gè)待測(cè)樣本檢測(cè)時(shí)都同時(shí)做樣本 ERC 。 2,根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)所需的各組分的所需總量以制備 pre-mix:
2×Taqman master mix=(反應(yīng)孔數(shù)+2) ×15ul (含有 2 孔的損失量)
10×CHO qPCR mix= (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×2ul
3,各試劑置于冰上融化,振蕩混勻,按表 3 所示進(jìn)行加樣:
表 3.各反應(yīng)孔加樣示例
標(biāo)準(zhǔn)曲線 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待測(cè)樣本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待測(cè)樣本 |
ERC 樣本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 樣本 |
注意事項(xiàng)
1.整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
CM-M017小鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLBariumchloridedihydrate二水合錄化鋇1克CP,95%
C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 導(dǎo)管癌細(xì)胞,ZR-75-1細(xì)胞 J-1111(白血病單核細(xì)胞)玫瑰紅酸鈉 Rhodizonic salt 523-21-7 5G 通用試劑
小鼠瘤細(xì)胞;EL4茄替膠;印度樹膠;錫蘭樹膠 GuM ghctti;Indicn guM;GuMMi indicuM 9000/8/6
REN Others Mouse 小鼠 REN1 / Renin-1 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) KANAMYCINSULFATE50MG/ML卡那霉素溶液超級(jí)透明無色溶液FROZENsigma
6-10B, 鼻咽癌細(xì)胞系661-19-8二十二醇1-Docosanol
產(chǎn)紫青霉PCR檢測(cè)試劑盒奧司他韋酸Oseltamivir 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 大鼠雌三醇(E3)ELISA檢測(cè)試劑盒RatEsiol,E3ELISAKit 96T/48T ELISAKitMMP-9兔子基質(zhì)金屬蛋白酶9規(guī)格:48T/96T
地布卡因Dibucaine質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 人端粒重復(fù)序列結(jié)合因子2(TERF2)試劑盒 Human TERF2 ELISA kit Chickenmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/BELISAKit雞主要組織相容性復(fù)合體(MHC/B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鹽酸地布卡因-d9Dibucaine-d9 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 Ratmonocytechemotacticprotein2,MCP-2ELISAKit大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
多利培南Doripenem質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 DNA末端平滑補(bǔ)缺同位素([35S]dATP)聚合酶標(biāo)記試劑盒20 小鼠白介素10(IL-10)試劑盒 Mouse ierleukin 10,IL-10 ELISA KIT
賴氨匹林(標(biāo)準(zhǔn)品)DL-Lysine Acetylsalicylate質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測(cè)定 人谷氨酸[NMDA]受體亞基ε-2(-2)試劑盒 Human -2 ELISA Kit 人抗膠原蛋白抗體(CLA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
甲霜靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=5%)Metalaxyl solution質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=5% RatGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit大鼠糖原1酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 小鼠巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)試劑盒 Mouse Macrophage-Derived Chemokine,MDC ELISA kit
殺螟(標(biāo)準(zhǔn)品)Fenitrothion質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 ATP酶法冰凍切片人體肌肉組織分型染色試劑盒20 幽門螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA試劑盒 ,英文名: Hp-IgM ELISA Kit
矮壯素(標(biāo)準(zhǔn)品) (2-Chloroethyl)trimethylammonium chloride質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 MouseHistoneDeacetylase,HDELISA試劑盒小鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T MonkeyIerferonγ,IFN-γELISA試劑盒猴γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
關(guān)鍵字: 產(chǎn)紫青霉核酸檢測(cè)試劑盒;產(chǎn)紫青霉PCR試劑盒;產(chǎn)紫青霉PCR擴(kuò)增試劑盒;產(chǎn)紫青霉PCR熒光探針試劑盒;產(chǎn)紫青霉通用型PCR試劑盒;
上海一研生物科技有限公司Shanghai yiyan bio-technology Co. Ltd.主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑等為一體的科研產(chǎn)品銷售企業(yè),公司自成立以來,秉承""全心全意服務(wù)于科研工作者""的企業(yè)理念,立足生物科技領(lǐng)域,運(yùn)用生物技術(shù)和科研試劑,發(fā)展現(xiàn)代生物科技,為各類大中小醫(yī)院及其它醫(yī)療機(jī)構(gòu)、高等院校、科研院所、企事業(yè)單位提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品,服務(wù)生物科技領(lǐng)域的科學(xué)研究人員。
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