參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：包納米蟲（Bona）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法） 

貨號:EY00P1789

產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

運輸：低溫

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實驗操作過程：

一、 CHO DNA 定量參考品的稀釋及標準曲線的制備

用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer 將 CHO control DNA 進行梯度稀釋， 稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具體操作如下：

1.將試劑盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，

輕微振蕩混勻，簡短快速離心。

2.取 6 支干凈的 1.5ml 離心管，分別標記為 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5, SD6。

3，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。

4,取 2ul  CHO  control  DNA 加入 SD1 管中，  然后渦旋振蕩混勻 5- 10s 后短時快速離心 5s，渦旋振蕩和快速離心各重復 3 次。

5,按表 2 依次進行 6 次梯度稀釋操作，稀釋操作同步驟 4。
                                 表 2. CHO control DNA 的稀釋

二、加樣回收質(zhì)控 ERC 的制備

根據(jù)待測樣本的殘留量設(shè)置 ERC 中 CHO  control  DNA 的加樣濃度  (以制備加 45pg  CHO control DNA 的樣本 ERC 為例)，操作如下：

1，取待測樣本 100u，加至 1.5ml 干凈的離心管中；

2，加入 1.5ul SD2，混勻，標記為樣本 ERC。

注：樣本 ERC 和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。

三、陰性質(zhì)控 NEG 的制備

根據(jù)實驗設(shè)置陰性質(zhì)控，操作如下：

1，取 100ul 樣本基質(zhì)溶液(或洗脫液)加至 1.5ml 干凈的離心管中標記為陰性質(zhì)控 NEG。 注：陰性質(zhì)控 NEG 樣本和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。

四、 qPCR 反應(yīng)液的制備和加樣

1，根據(jù)所要檢測的標準曲線及待測樣本數(shù)量，計算所需反應(yīng)孔數(shù)，一般做 3 個重復孔/樣。

反應(yīng)孔數(shù)=  (6 個濃度梯度+1 個無模板對照 NTC+1 個陰性質(zhì)控 NEG+待測樣本×2) ×3 注：待測樣本×2 是為了讓每個待測樣本檢測時都同時做樣本 ERC 。                  2，根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計算本次實驗所需的各組分的所需總量以制備 pre-mix：

2×Taqman master mix=(反應(yīng)孔數(shù)+2) ×15ul    (含有 2 孔的損失量)

10×CHO qPCR mix=  (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×3ul

RNase-free H2O=  (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×2ul

3，各試劑置于冰上融化，振蕩混勻，按表 3 所示進行加樣：

                                  表 3.各反應(yīng)孔加樣示例

注意事項

1.整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

3.每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。

4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。

5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。

6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記。

7.儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。

8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。

 人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa檢測試劑盒

 小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒

 人癌胚抗原(CEA/CD66)elisa檢測試劑盒

 人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)elisa檢測試劑盒

 人卵巢癌標志物CA25elisa檢測試劑盒

 人乳腺癌標志物-CA53elisa檢測試劑盒

 人胃腸癌標志物CA99elisa檢測試劑盒

 人胰腺癌標志物CA242elisa檢測試劑盒

 人鱗狀上皮細胞癌抗原2(SCCAg-2)elisa檢測試劑盒

 人胃癌標志物elisa檢測試劑盒

 人肺癌標志物elisa檢測試劑盒

 人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)elisa檢測試劑盒

 人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMP-)elisa檢測試劑盒

 人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)elisa檢測試劑盒

 小鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒

 人鐵蛋白(FE)elisa檢測試劑盒

 人細胞周期素D(Cyclin-D)elisa檢測試劑盒

 人細胞周期素D2(Cyclin-D2)elisa檢測試劑盒

 人細胞周期素D3(Cyclin-D3)elisa檢測試劑盒

 人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD7)elisa檢測試劑盒

 人黑色素細胞抗體(MCAb)elisa檢測試劑盒

 人克拉拉細胞蛋白(CC6)elisa檢測試劑盒

SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（5×，還原）（可提供標記服務(wù)）

TBS (Tris Buffered Saline, pH7.2, 10x)（可提供標記服務(wù)）

AuraStain SP鼠/兔IHC試劑盒（可提供標記服務(wù)）

TMB底物顯色試劑盒（可溶型）（可提供標記服務(wù)）

RIPA裂解液（弱）（可提供標記服務(wù)）

藍色預(yù)染蛋白分子量標準(20-120 kDa)（可提供標記服務(wù)）

SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（5×，非還原）（可提供標記服務(wù)）

TBST (Tris Buffered Saline Tween-20, pH7.5, 10x)（可提供標記服務(wù)）

RIPA裂解液（強中弱套裝）（可提供標記服務(wù)）

考馬斯亮藍染色液（常規(guī)法）（可提供標記服務(wù)）

SDS-PAGE凝膠電泳緩沖液 (10x)（可提供標記服務(wù)）

AuraStain SP鼠IHC試劑盒（可提供標記服務(wù)）

麗春紅染色液（可提供標記服務(wù)）

NP-40裂解液（可提供標記服務(wù)）

考馬斯亮藍染色脫色液（常規(guī)法）（可提供標記服務(wù)）

SDS-PAGE凝膠轉(zhuǎn)膜緩沖液(10x)（可提供標記服務(wù)）

蛋白示蹤上樣緩沖液（還原，5×）（可提供標記服務(wù)）

SDS裂解液（可提供標記服務(wù)）

G250蛋白快速染色試劑（可提供標記服務(wù)）

1.5M Tris-Cl (pH8.8)（可提供標記服務(wù)）

包納米蟲（Bona）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）AuraStain SP兔IHC試劑盒（可提供標記服務(wù)）

蛋白示蹤上樣緩沖液（非還原，5×）（可提供標記服務(wù)）

0.5M Tris-Cl (pH6.8)（可提供標記服務(wù)）

Western Blot轉(zhuǎn)膜液（粉劑）（可提供標記服務(wù)）

30% Acr-Bis (29:1)（可提供標記服務(wù)）