描述 | Rapamycin (Sirolimus) 是一種特異性的 mTOR 抑制劑,IC50 為 0.1 nM。 |
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相關類別 | 信號通路 >> 自噬 >> 自噬 信號通路 >> PI3K/Akt/mTOR 信號通路 >> mTOR 研究領域 >> 癌癥 天然產物 >> 其他 |
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靶點 | mTOR:0.1 nM (IC50) Autophagy |
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體外研究 | 雷帕霉素抑制HEK293細胞內源性mTOR活性,IC50為0.1 nM,比iRap和AP21967更有效,IC50分別為5 nM和10 nM [1]。雷帕霉素通過誘導自噬發(fā)揮其對惡性神經膠質瘤細胞的抗腫瘤作用,并且表明在惡性神經膠質瘤細胞中PI3K / Akt信號傳導途徑的破壞可以極大地增強mTOR抑制劑的有效性。雷帕霉素以劑量依賴性方式抑制所有三種細胞系中的細胞活力,但它們的敏感性不同。 T98G,U87-MG和U373-MG細胞的IC50水平分別為2 nM,1μM和>25μM[3]。 |
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體內研究 | 雷帕霉素(ip,1.5 mg / kg)治療幾乎完全可以防止7天和14天跖肌重量和纖維大小的肥大增加[4]。每天用WT或LS / +小鼠雷帕霉素(2mg / kg體重ip)處理4周,然后每周注射相同劑量另外4周。來自雷帕霉素處理的LS / +小鼠的心臟的異常胎兒基因表達譜顯著逆轉[5]。 |
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溶解度 | 體外: DMSO:150 mg / mL(164.08 mM;需要超聲波) H 2 O:<0.1 mg / mL(不溶) 體內:1。逐個添加每種溶劑:10%DMSO 90%玉米油溶解度:≥2.5mg / mL(2.73 mM);澄清溶液2.逐個加入各溶劑:10%DMSO 90%(20%SBE-β-CD在鹽水中)溶解度:2.5mg / mL(2.73mM);暫停解決方案;需要超聲波和加熱3.逐個添加每種溶劑:10%DMSO 40%PEG300 5%吐溫-80 45%鹽水溶解度:≥2.5mg / mL(2.73 mM);明確解決方案 |
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儲備液 | 1 mM1.0939 mL5.4694 mL10.9389 mL5 mM0.2188 mL1.0939 mL2.1878 mL10 mM0.1094 mL0.5469 mL1.0939 mL |
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激酶實驗 | 將HEK293細胞以每孔2-2.5×10 5個細胞接種于12孔板中,僅在DMEM中血清饑餓24小時。將細胞模擬處理或用雷帕霉素(0.05-50nM),iRap(0.5-500nM)或AP21967(0.5-500nM)在37℃處理15分鐘。在37℃下將血清加入終濃度為20%的30分鐘。裂解細胞并通過SDS-PAGE分離細胞裂解物。將分離的蛋白質轉移至PVDF膜,并用針對p70 S6激酶的Thr389的磷酸特異性一抗進行免疫印跡。使用ImageQuant和KaleidaGraph [1]分析數(shù)據(jù)。 |
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細胞實驗 | HL-60,NB4,U937,KG-1和K562細胞常規(guī)傳代于RPMI-1640中,補充有10%熱滅活的FBS,2 mM L-谷氨酰胺,50 U / mL青霉素和50μg/ mL鏈霉素。在37°C下,5%CO2加濕的氣氛。對于實驗,通過離心收獲指數(shù)生長的細胞,并重懸于含有10%FBS的新鮮培養(yǎng)基中。在各種濃度的DMSO或1μMATRA存在下,在BD Falcon六孔板中以2×10 5 / mL的初始細胞密度接種細胞。在分化劑之前20分鐘加入雷帕霉素(20nM)。在第2天,向每個孔中加入0.3mL新鮮培養(yǎng)基。通過臺盼藍排除法測定活細胞,并使用血細胞計數(shù)器進行定量[2]。 |
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動物實驗 | 將雌性Sprague-Dawley大鼠(250-275g),成年雌性SD大鼠(225-250g)隨機分配至治療組或媒介物組,使得每組的平均起始體重相等。藥物治療開始于手術當天或14天停藥后重新加載的天。雷帕霉素每天一次通過腹膜內注射以1.5mg / kg的劑量遞送,溶于2%羧甲基纖維素中。 CsA每天一次通過皮下注射以15mg / kg的劑量遞送,溶于10%甲醇和橄欖油中。 FK506每天一次通過皮下注射以3mg / kg的劑量遞送,溶于10%乙醇,10%的cremophor和鹽水中。將小鼠[5]雷帕霉素以20 mg / mL的濃度溶解于乙醇中,過濾滅菌,重懸于載體(0.25%PEG,0.25%吐溫-80)中,濃度為1 mg / mL,腹腔注射(2 mg) / kg體重),每天4周或每天4周,然后每周注射另外4周。注射開始于8周(肥大發(fā)作前)或12周(表明確定肥大后)的年齡,并在治療4周后或治療8周后評估小鼠,詳見結果和圖例。 。作為對照,WT和LS / +小鼠僅用載體處理。 |
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運輸 | 室溫;可能會有所不同 |
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SMILES | O=C([C@@]1(O)[C@@H](CC[C@@H](C[C@@H](/C(C)=C/C=C/C=C/[C@H](C[C@@H](C)C([C@@H]([C@@H](/C(C)=C/[C@H]2C)O)OC)=O)C)OC)O1)C)C(N3CCCC[C@H]3C(O[C@@H](CC2=O)[C@@H](C[C@H]4C[C@H]([C@H](O)CC4)OC)C)=O)=O |
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參考文獻 | [1]. Edwards SR, et al. The rapamycin-binding domain of the protein kinase mammalian target of rapamycin is a destabilizing domain. J Biol Chem, 2007, 282(18), 13395-13401. [2]. Lalic H, et al. Rapamycin enhances dimethyl sulfoxide-mediated growth arrest in human myelogenous leukemia cells. Leuk Lymphoma. 2012 Nov;53(11):2253-61. [3]. Takeuchi H, et al. Synergistic augmentation of rapamycin-induced autophagy in malignant glioma cells by phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B inhibitors. Cancer Res, 2005, 65(8), 3336-3346. [4]. Bodine SC, et al. Akt/mTOR pathway is a crucial regulator of skeletal muscle hypertrophy and can prevent muscle atrophy in vivo. Nat Cell Biol, 2001, 3(11), 1014-1019. [5]. Marin TM, et al. Rapamycin reverses hypertrophic cardiomyopathy in a mouse model of LEOPARD syndrome-associatedPTPN11 mutation. J Clin Invest. 2011 Mar;121(3):1026-43. |
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相關活性 小分子 | 都靈1 | 4,6-二-4-嗎啉基-N-(4-硝基苯基)-1,3,5-三嗪-2-胺 | 沙帕色替 | AZD-8055 | Dactolisib | 維妥色替 | Torkinib | LY3023414 | 9-(6-氨基-3-吡啶基)-1-[3-(三氟甲基)苯基]苯并[H]-1,6-萘啶-2(1H)-酮 | 奧米利塞 | 雌激素三醇 | 紅景天苷 | Bimiralisib | 反式-4-[4-氨基-5-(7-甲氧基-1H-吲哚-2-基)咪唑并[5,1-F][1,2,4]三嗪-7-基]環(huán)己烷羧酸 | PI-103 抑制劑 |
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