氮自由基（DPPH）清除能力測試試劑盒
(A001-96T 分光光度計(jì)法)
一.測定原理
DPPH自由基是一種較穩(wěn)定的含氮自由基，有一個(gè)單電子，在517nm下有強(qiáng)吸收，如果有其他物質(zhì)提供一個(gè)電子使此單電子配對，其吸收會消失褪色，褪色程度與接受電子的量呈正比。即反應(yīng)物清除氮自由基的能力與試劑在517nm的吸光值成反比。
二.試劑組成
試劑一：DPPH試劑1mL×1瓶
試劑二：100μg/mL 維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液 20mL×1瓶
三.儲存條件及有效期
試劑盒-20℃可保存6個(gè)月。
四.試劑的配制
試劑一：37℃平衡20min以上，待試劑融化后，在試劑瓶中加入100ml 95%乙醇或無水乙醇，劇烈震蕩使試劑充分溶解。
注意：溶解一定要充分，如有條件可采用超聲波助溶。
試劑二應(yīng)用液：根據(jù)是否需要制作陽性對照標(biāo)準(zhǔn)曲線有兩種配制方法。
1. 如僅需要將維生素C作為質(zhì)控品，可取100μL 試劑二，加入900μL樣品稀釋液，充分混勻；
2. 如需測定維生素C的IC50，可分別移取0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0mL 試劑二于空離心管中，再依次加入10.0，9.5，9.0，8.5，8，7.5，7.0，6.0，5.0ml樣品稀釋液，充分混勻。配制成0，5，10，15，20，25，30，40，50 μg/mL 維生素C樣品。
五.操作步驟
| 空白孔1 | 測定孔 | 對照孔2 | 質(zhì)控孔 |
試劑一（mL） | 1 | 1 | 0 | 1 |
樣品溶液（mL） |
| 1 | 1 |
|
試劑二應(yīng)用液（mL） |
|
|
| 1 |
樣品稀釋液（mL） | 1 |
|
|
|
充分混勻，室溫避光靜置30min使之充分反應(yīng)。選用0.5mm比色皿3，517nm處測定吸光值。
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