英文名稱:Cyanine3.5 amine
Cyanine3.5-NH2
中文名稱:Cy3.5 氨基
分子式:C44H56Cl2N4O
分子量:727.85
外觀:固體或粉末
純度:>95%
ex/em : 591/604 nm (PBS緩沖液)
消光系數(shù)(ε) : 116000 L?mol?1?cm?1
量子產(chǎn)率(Φ) : 0.35
溶解性 :可溶于氯仿,甲醇,乙腈,DMF等有機(jī)溶劑,難溶于水
保存條件 :避光,干燥,-20oC保存
結(jié)構(gòu)式:
Cy3.5 (Cyanine 3.5) 是一種發(fā)紅色熒光的花青素類熒光染料。Cy3.5在顯影時可以用561nm或者594nm的激光束激發(fā)然后用 Texas Red? 相似的濾片觀察,它是一種非常常用的標(biāo)記染料。Cy3.5-NHS可以用來標(biāo)記蛋白,抗體,多肽,核酸分子,納米粒等。
胺基(primary amine)是生物標(biāo)記反應(yīng)中常用的基團(tuán)。蛋白表面賴氨酸側(cè)鏈(residue)官能團(tuán)就是伯氨基,伯胺基可以和NHS活化酯(N-羥基琥珀酰亞胺酯,N-hydroxysuccinimide ester,succinimidyl ester),異氰酸酯(isothiocyanate, ITC)或其它活化基團(tuán)反應(yīng)生成穩(wěn)定鏈接,從而把Cy3.5分子連接到目標(biāo)分子上。
Cy3.5-伯胺的水溶性較低,所以在水相的標(biāo)記反應(yīng)體系內(nèi)需要使用有機(jī)共溶劑,常用有機(jī)溶劑包括DMF,DMSO和乙腈等。如需標(biāo)記的分子對有機(jī)溶劑敏感,可選擇磺化花青素(sulfonated cyanine),即磺化-Cy3.5-伯胺( D10031 )。兩者的光譜性質(zhì)幾乎一致,因此大部分應(yīng)用可相互替換。兩者的主要區(qū)別在于:磺化染料是水溶性的,在水相的標(biāo)記反應(yīng)體系內(nèi)不需要使用有機(jī)共溶劑,并且降低染料在水中聚集的可能性,增強(qiáng)標(biāo)記效率。
Cy3.5-伯胺標(biāo)記后的產(chǎn)物Ex/Em是591nm/604nm。和它具有相似熒光特性的染料包括Texas Red?,Alexa Fluor 594, BODIPY? TR, DyLight 594等。
注意事項
Cy3.5-伯胺水溶性較低,標(biāo)記反應(yīng)可在有機(jī)溶劑中進(jìn)行或者含有機(jī)助溶劑的水相中進(jìn)行。
標(biāo)記時使用不含氨基的緩沖體系,比如磷酸鈉緩沖液(PBS),Hepes緩沖液,碳酸氫鈉緩沖液;或硼酸緩沖液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的緩沖液,比如Tris,甘氨酸等,它們會和Cy3.5上的伯胺競爭。高濃度咪唑(imidazole)也會影響反應(yīng)。
標(biāo)記反應(yīng)不要放在強(qiáng)光下,因為大部分熒光化合物在強(qiáng)光下長時間照射會緩慢光漂泊(photobleaching)。
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關(guān)鍵字: Cyanine3.5 amine;Cyanine3.5-NH2;Cy3.5 NH2;花青素Cy3.5 氨基;
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