高轉移人肝癌細胞 HCC-LM3產品基本信息
細胞名稱:HCC-LM3,高轉移人肝癌細胞
細胞規(guī)格1x106cells/T25或1mL凍存管
細胞貨期現貨,1周左右
種屬來源:人
組織來源:肝臟
細胞形態(tài):上皮細胞樣
生長特性:貼壁生長
培養(yǎng)基:: 90%DMEM+10% FBS+PS
生長條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
傳代方法:1:2至1:3,每周2-3次
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存
支原體檢測:無
注意事項:限于科學研究等非醫(yī)療目的,不可用于人類或者動物的臨床診斷使用
高轉移人肝癌細胞 HCC-LM3培養(yǎng)操作
1)復蘇細胞
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2
mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中,加入約4
mL完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1
-3min(視細胞消化情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000
rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)細胞凍存
待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
培養(yǎng)注意事項
1.
收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象,干冰運輸的細胞檢查干冰是否完全揮發(fā),細胞是否解凍,若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系。
2.
仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。
3.
用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰死亡破碎形成碎片,是正常現象。.觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h。
4. 貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900 rpm-1000 rpm離心3 min,棄上清。加5 mL PBS重懸細胞,再900
rpm-1000 rpm離心3 min,,用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6.
建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 說備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。
收到細胞后*一次傳代建議1:2傳代 。
9. 注意: 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。
關鍵字: HCC-LM3人高轉移肝癌細胞(STR鑒;HCC-LM3;HCC-LM3細胞;
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