1.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡(jiǎn)稱 CFPAC-1
細(xì)胞別稱 CFPac-1; CF PAC-1; CF-PAC1; CF-Pac1; CF Pac1; CFPAC1; CFPac1;CFPAC
細(xì)胞背景描述 CFPAC-1細(xì)胞是胰腺管腺癌細(xì)胞系,建自26歲白人男性囊性纖維變性(CF)的肝轉(zhuǎn)移灶。CFPAC-1細(xì)胞表達(dá)囊性纖維變性跨膜調(diào)節(jié)因子(CFTR),CFPAC-1細(xì)胞形態(tài)為上皮細(xì)胞樣且頂端微絨毛極化。CFPAC-1細(xì)胞表達(dá)胰腺管細(xì)胞特征性的細(xì)胞角蛋白和癌胚抗原,倍增時(shí)間為30-32小時(shí)。CFPAC-1細(xì)胞是亞3倍體的細(xì)胞系,36%的細(xì)胞的染色體模式數(shù)為75。CFPAC-1細(xì)胞傳代至24代時(shí),可在免疫抑制小鼠中致瘤。
供體年齡 男;26歲
組織來源 胰腺管腺癌,肝轉(zhuǎn)移
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 胰腺癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級(jí) 1
2.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 IMDM(PM150510)+10% FBS(164210-50)+1% P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
3.傳代方法:
傳代步驟 1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時(shí)可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
消化時(shí)間 2~3分鐘
傳代比例(密度) 1:3-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時(shí)間 ~30-45 hours