1.售前須知:
1. 細(xì)胞貼壁慢特別是剛復(fù)蘇時,一般兩到三天貼壁展開,會有空泡; 2. 細(xì)胞在傳代細(xì)胞中注意消散,不然難貼壁; 3. 成團(tuán)生長,細(xì)胞密度越大,表面空泡黑點越多;4. 一般細(xì)胞長至80%傳代,細(xì)胞成片,其實密度很大; 5. 細(xì)胞生長太滿對細(xì)胞狀態(tài)影響嚴(yán)重,傳代后易碎,死亡; 6. 細(xì)胞生長時間越久,消化難度也會隨之增加;消化到輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)邊細(xì)胞可以滑落的時候可以終止。
2.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡稱 Caco-2
細(xì)胞別稱 CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2;Caco-2/ATCC細(xì)胞背景描述 Caco-2細(xì)胞分離自直腸原位癌;當(dāng)長到滿時,Caco-2細(xì)胞表現(xiàn)出特征性的腸上皮細(xì)胞分化。Caco-2細(xì)胞表達(dá)維甲酸結(jié)合蛋白I和維甲酸
結(jié)合蛋白Ⅱ,并呈角質(zhì)蛋白陽性。
供體年齡 男;72歲
組織來源 結(jié)腸,結(jié)直腸腺癌
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 腸癌細(xì)胞
生長特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級 1
3.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 MEM(含NEAA)(PM150410)+20% FBS(164210-50)+1%P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
4.傳代方法:
傳代步驟 1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
消化時間 3~5分鐘
傳代比例(密度) 1:3-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時間 ~60-80 hours