技術(shù)指標(biāo)
外觀：黃色無定型凍干粉末；蛋白純度：≥90%；比活性：≥8U/mg酶粉；過氧化氫酶：≤0.001%；膽固醇酯酶：≤0.01%；葡萄糖氧化酶：≤0.01%；ATP酶：≤0.005%
酶學(xué)性質(zhì)
來源：微生物，膽固醇氧化酶；分類：EC1.1.3.6；分子量：60kDa(SDS-PAGE)；等電點：5.6；Km值：3.3×10-4M(Cholesterol)；抑制劑：SDS，Ag+，Zn2+，Hg2+；最適pH：7.0；最適溫度：50℃；pH穩(wěn)定性：pH5.5-10(25℃,16h)；熱穩(wěn)定性：40℃以下穩(wěn)定（pH7.0,30min）；穩(wěn)定性：-20℃靜置保存12個月保持90%以上活性；保護劑：BSA以及非離子型表面活性劑。
用途：用于高、低密度脂蛋白膽固醇試劑的研發(fā)和大量配制。
酶活定義：單位酶活定義為在下述條件下，每分鐘催化生成1μmolH2O2所需的酶量。
試劑準(zhǔn)備
試劑I：0.1M磷酸鉀緩沖液，pH6.5。
試劑II：在500ml燒杯中加入5mLTritonX-100和0.5g膽固醇，用保鮮膜密封，用微波爐加熱至膽固醇完全溶解。緩慢加入90mL雙蒸水，加熱并使其沸騰30-60s，溶液將變渾濁。用自來水淋洗使溶液冷卻，冷卻后的溶液會變澄清，若冷卻后未變澄清則需要重新加熱使其完全溶解。在澄清的溶液中加入0.4膽酸鈉，用雙蒸水定容至100mL。定容后用0.22um濾膜過濾，此溶液在室溫下一周內(nèi)穩(wěn)定。如果該溶液變渾濁，可輕微加熱使其澄清。
試劑III：純水配制100U/mLPOD。
試劑IV：50mM4-AA溶液（1.016g4-AA溶于100mLUP水）。
試劑V：50mMTOOS溶液（1.477gTOOS溶于100mLUP水）。
酶稀釋液：20mM磷酸鉀緩沖液，pH7.0，含0.2%BSA。
樣品：用酶稀釋液將酶稀釋至0.05-0.2U/mL。
操作步驟
1.將反應(yīng)混合物置于37℃水浴鍋預(yù)熱；
2.向1mL比色皿中加入0.9mL反應(yīng)混合物。
3.向反應(yīng)混合物中加入0.1mL待測酶液，混勻。
4.37℃反應(yīng)，用分光光度計在555nm檢測樣品1min內(nèi)的吸光度變化（ΔAs）
關(guān)鍵字： 膽固醇氧化酶;膽固醇氧化酶（COD）;Cholesterol Oxidase;COD;
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