產(chǎn)品信息
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格 |
M1115 | Zeocin 博來霉素（溶液） | 100mg | 420 |
M1117 | Zeocin 博來霉素（溶液） | 10×100mg | 4000 |
M1119 | Zeocin 博來霉素（溶液） | 50×100mg | 12886 |
M1215 | Zeocin 博來霉素（粉末） | 1g | 2755 |
M1217 | Zeocin 博來霉素（粉末） | 5g | 10379 |
產(chǎn)品簡介
Zeocin是腐草霉素D1（Phleomycin D1）的商業(yè)名稱，其中文名稱博來霉素是一種銅離子螯合的糖肽抗生素（來源于鏈霉菌Streptomyces verticillus的突變株），銅離子的存在使其呈藍色，此銅螯合的形式為無活性。當抗生素進入細胞后，二價銅離子（Cu2+）被還原為一價銅離子（Cu+），并被細胞內(nèi)的巰基化合物去除。銅離子被去除后，Zeocin被活化，嵌入DNA使其斷裂，最終導致細胞死亡。博來霉素是作用譜廣泛，對細菌、真核微生物、植物和哺乳動物細胞具很強的毒性。博來霉素常用作一種非常有效的工具抗生素，用來篩選攜帶Sh ble抗性基因并能穩(wěn)定表達分子量為13.665 kDa的一種博來霉素抗性蛋白的細胞株。博來霉素是的用量為 50-2000 ug/ml（通常 300 ug/ml），具體取決于細胞類型。
warbio公司提供無菌溶液形式的Zeocin，濃度是100mg/ml，使用起來更加方便，只需直接加入培養(yǎng)基到所需工作濃度即可。
產(chǎn)品性質
分子式（Formula）：C55H85O21N20S2Cu - HCl
Cas: 11006-33-0
分子量（Molecular Weight）：1535
外觀（Appearance）：藍色粉末
內(nèi)毒素：＜1 EU/mg
純度（Purity）：>90%(HLPC)
溶解性：易溶于水（>500 mg/ml）
細胞培養(yǎng)測試：在 Zeocin? 敏感和 Zeocin? 抗性哺乳動物細胞系中驗證效力
微量污染物無細胞毒性：在抗 Zeocin? 細胞中證實不存在長期影響
應用參考濃度：
1）大腸桿菌篩選：25-50μg/mL（低鹽LB培養(yǎng)基，NaCl濃度不能超過5g/L）
2）酵母菌篩選：50-300μg/mL（YPD或基本培養(yǎng)基）
3）哺乳動物細胞篩選：50-1000μg/mL（合適培養(yǎng)基，根據(jù)細胞系而不同）
使用步驟參考
一、細胞對Zeocin敏感性的確定（殺滅曲線建立）
重新鋪板或者將滿盤細胞重新分盤，使得細胞密度約25%，按照8個平板/組準備，培養(yǎng)24h，去除舊培養(yǎng)基。
加入含不同濃度Zeocin的篩選培養(yǎng)基，Zeocin濃度可設置為0, 50, 100, 200, 400, 600, 800和1000 μg/ml，每個濃度做3個平行；也可根據(jù)自身實驗體系，設置不同的濃度梯度。
每3-4天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察存活細胞的比例。選擇在合適時間（1-2周內(nèi)）殺死大多數(shù)細胞的濃度為最加工作濃度?！咀ⅰ浚喝羰请y以在顯微觀察下區(qū)分活細胞，建議使用臺盼藍染色來計算存活細胞的數(shù)量，以確定Zeocin的最適濃度。
二、篩選穩(wěn)定轉染細胞系
轉染細胞，用100mm培養(yǎng)皿進行培養(yǎng)。以未轉染的細胞作為陰性對照。
轉染后，用預熱的1X PBS洗滌一次，加入新鮮培養(yǎng)基。
轉染48-72h后，用含有最加濃度Zeocin（由滅殺曲線確定）的新鮮培養(yǎng)基篩選細胞。為了更好的鑒定和篩選細胞集落，建議將細胞按比例稀釋成一系列濃度。
【注】：若待篩選細胞對Zeocin的抗性明顯強于大部分細胞，按照以下方法克服此類耐性：用含Zeocin培養(yǎng)基進行細胞分盤，置于37°C孵育2-3h，使得細胞貼壁。然后將細胞置于4°C，2h。記得使用Hepes作為培養(yǎng)基的緩沖體系。重新將細胞置于37°C孵育。4°C孵育細胞的目的是短時間內(nèi)終止細胞分化，使得Zeocin能發(fā)揮作用，殺死細胞。
每3-4天更換新鮮的選擇培養(yǎng)基，直到出現(xiàn)細胞集落。
挑選并轉移克隆到96或48孔板中。在進行更大孔徑培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿上擴大培養(yǎng)之前，確保培養(yǎng)細胞密度近100%。
三、穩(wěn)定轉染細胞系的維持培養(yǎng)
可采取以下方式維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉染細胞：
1）使用含相同劑量Zeocin的篩選培養(yǎng)基來維持培養(yǎng)；
2）降低Zeocin劑量為原來的一半進行維持培養(yǎng)；
3）使用正好能預防敏感細胞生長但不足以致死的Zeocin劑量來維持培養(yǎng)【根據(jù)殺滅曲線來判斷】。
相關產(chǎn)品：
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 儲存 |
M0943 | 潮霉素B Hyaromycin B | 1g | 650 |
M0942 | 潮霉素B（50 mg/ml）Hygromycin B (50 mg/ml) | 1g | 680 |
M9337 | Blasticidin S (10 mg/ml) 殺稻瘟菌素S （滅瘟素）（10 mg/ml） | 5×10mg | 2450 |
M0336 | Phleomycin (20mg/ml) 腐草霉素（20 mg/ml） | 20mg | 921 |
M2150 | Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素鹽酸鹽 | 25mg | 678 |
CB937 | Vancomycin Hydrochloride 鹽酸萬古霉素 | 1g | 1868 |
注意事項：
Zeocin?對光敏感，需將抗生素，或含該抗生素的平板或培養(yǎng)基置于黑暗處。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
運輸與保存
儲存在-30°C~-10°C，使用前需冰上融化。
關鍵字： Zeocin， 博來霉素，InvivoG;
南京沃博生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售為一體的高新技術企業(yè)。沃博生物專注于生命科學和生物技術領域， 致力于為客戶提供一系列高質量和有絕對價格競爭力的產(chǎn)品，包括分子生物學、免疫學、生物化學和細胞生物學相關的試劑、試劑盒， 并提供一系列相關的技術服務。