產(chǎn)品簡介
江苑生物的慢病毒包裝試劑盒（Lentiviral Packaging Kit）由優(yōu)化的慢病毒包裝輔助質(zhì)?；旌衔铮?/span>Packaging Mix）、表達eGFP蛋白的對照質(zhì)粒（eGFP Control）和高效的轉(zhuǎn)染試劑（Transfection Reagent）組成，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質(zhì)粒。
Lentiviral Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需成分如：gag基因，編碼病毒主要的結(jié)構(gòu)蛋白；pol基因，編碼病毒特異性的酶；rev基因，編碼調(diào)節(jié)gag和pol基因表達的調(diào)節(jié)因子；還含有單純皰疹病毒來源的VSV-G基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白。江苑生物的慢病毒包裝系統(tǒng)產(chǎn)生的慢病毒為“自殺”性病毒，即病毒感染目的細胞后不會再感染其他細胞，也不會利用宿主細胞產(chǎn)生新的病毒顆粒。慢病毒中的毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒。
本試劑盒具有慢病毒包裝時間周期短（一周之內(nèi)即可獲得純化好的高滴度慢病毒）和病毒滴度高的優(yōu)勢，可應(yīng)用于針對不同基因和藥物靶標的細胞學(xué)實驗和整體動物實驗。非常適合于病毒包裝初試者。
產(chǎn)品組分
組分名稱 | 儲存 | 產(chǎn)品貨號/規(guī)格 |
JY03021 | JY03022 | JY03023 |
Packaging Mix | -20℃ | 150 μL | 300 μL | 600 μL |
eGFP Control | -20℃ | 7.5 μg | 7.5 μg | 7.5 μg |
Transfection Reagent | 4℃ | 240 μL | 480 μL | 960 μL |
保存條件
冰袋運輸。Transfection Reagent 4 oC保存，長期不使用可-20oC保存。其余組分均于-20℃保存, 避免反復(fù)凍融。保質(zhì)期1年有效。
注意事項
1．廢棄的含病毒的培養(yǎng)基中加入84消毒液（1:20左右），浸泡1天后丟棄。接觸過病毒的槍頭，離心管，培養(yǎng)板等其他物品可用84消毒液稀釋液處理，也可以用煮沸處理半小時或常規(guī)滅菌（121℃，20 min）。
2．本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究。
3．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
還需準備的其他實驗材料
1．表達目的基因的慢病毒載體質(zhì)粒：在慢病毒包裝前，需要先獲得感興趣的目的基因慢病毒載體，該載體可能表達目的基因、shRNA或microRNA等。以無內(nèi)毒素高純度的試劑盒提取表達目的基因的慢病毒載體質(zhì)粒，并將質(zhì)粒DNA溶于無菌的TE或ddH2O中，測定其濃度及純度，保證質(zhì)粒DNA的A260/A280在1.8-2.0之間。江苑生物提供基因過表達、shRNA/miRNA介導(dǎo)的基因沉默、CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因敲除等服務(wù)。
2．慢病毒包裝用293T細胞株：良好的細胞狀態(tài)對病毒的包裝至關(guān)重要，避免細胞培養(yǎng)基有細菌、真菌或支原體的污染，盡量使用傳代次數(shù)較少的細胞，如果細胞是剛復(fù)蘇的話，更好傳兩代之后再包裝。
3．細胞培養(yǎng)基，血清和雙抗等
4．其他常用實驗耗材（如10 cm培養(yǎng)皿，離心管等）
使用說明
以10 cm培養(yǎng)皿為例：
1．293T細胞分盤：轉(zhuǎn)染前，將293T細胞以合適的比例傳代到10 cm培養(yǎng)皿中，當細胞長到70%-90%時準備轉(zhuǎn)染。
注：細胞要充分消化，成團細胞影響轉(zhuǎn)染效率。
2．轉(zhuǎn)染前換液：轉(zhuǎn)染前將需要轉(zhuǎn)染的細胞換成新鮮的完全培養(yǎng)基（含有血清和抗生素），10 mL/10 cm皿。注：293T細胞貼壁性不是很好，換液時應(yīng)小心滴加盡量避免沖起細胞?？股睾脱宀粫绊戅D(zhuǎn)染效率，也不會在細胞轉(zhuǎn)染后導(dǎo)致細胞毒性。
3．轉(zhuǎn)染：取無菌的離心管，加入750 μL DMEM（不含血清和抗生素），7.5 μg表達目的基因的慢病毒載體質(zhì)粒（自行提供），和15 μL Packaging Mix，用槍輕輕吹打混勻；再加入25 μL Transfection Reagent，用槍輕輕吹打混勻，請?zhí)貏e注意不可Vortex或離心。將混合液均勻滴加到提前換液的培養(yǎng)皿中，輕輕混勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，后續(xù)無需在數(shù)小時后更換培養(yǎng)液。
DMEM | 750 μL |
表達目的基因慢病毒載體質(zhì)粒 (或者eGFP Control，作為對照) | 7.5 μg (eGFP Control 7.5 μg) |
Packaging Mix | 15 μL |
Transfection Reagent | 25 μL |
注：上述混合液室溫存放6 h內(nèi)穩(wěn)定。
4．病毒收集：轉(zhuǎn)染36 h左右后，吸取上清至新的離心管中，4℃保存。另外添加10 mL新鮮的完全培養(yǎng)基到細胞中，注意不要沖起細胞。再次大約36 h后，收取上清至同一個離心管中。將兩次收集的上清用0.45 μm濾器過濾后轉(zhuǎn)移到新的離心管中（若沒有0.45 μm濾器，將上清3000 rpm，4 ℃離心5 min，棄沉淀亦可）。此時上清液中的病毒顆粒可以直接檢測滴度或者感染目的細胞，如果對病毒的滴度及純度有較高要求，可對上清液進行濃縮與純化。
注：如果使用濾器過濾，只能使用低蛋白結(jié)合力的纖維素醋酸酯或聚醚砜（PES）膜，不能用硝酸纖維素膜（NC）。
5．（可選）慢病毒濃縮：可以使用江苑生物的慢病毒濃縮試劑盒（JY03011）進行慢病毒濃縮，效率更高。同時，也可以自行配制PEG-8000慢病毒濃縮液濃縮慢病毒。
6．病毒分裝與保存：將病毒上清或濃縮后的病毒分裝，保存于-80℃。
注：病毒液一定要分裝，切忌反復(fù)凍融，凍融一次病毒滴度將降低20-60%。
圖1 江苑生物與**公司慢病毒包裝試劑盒包裝效率比較
關(guān)鍵字： 慢病毒，包裝，試劑盒，質(zhì)粒;
本公司為面向?qū)W校和醫(yī)院等科研機構(gòu)的生物試劑解決方案提供商，銷售各種試劑，抗體等，并提供相關(guān)實驗設(shè)計，實驗外包等相關(guān)服務(wù)